包括67个y-str基因座和1个性别决定基因座amelogenin)。相比于illumina公司的forenseqtmdnasignatureprepkit,本发明提供的试剂盒中包含41个新的y-str基因座,能提供更多新的遗传信息。而且本发明提供的复合扩增体系中所有y-str基因座的**大扩增子长度都小于300bp,而forenseqtmdnasignatureprepkit中有约%(7/24)基因座的**大扩增子长度大于300bp,不利于降解检材的分析。本发明提供的试剂盒是本发明的发明人经过大量实验摸索获得的,试剂盒中的引物具有不可替换性;即引物被替换后,部分基因座将会被抑制且抑制效果不可预知。实验证明,采用本发明提供的试剂盒检测标准品2800m中68个基因座的str分型,分型结果准确。本发明具有重要的应用价值。附图说明图1为67个y-str基因座的pcr扩增产物的长度范围分布。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,北京全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验,北京全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导,均设置三次重复实验,结果取平均值,北京全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导。标准品2800m为promega公司的产品,产品目录号为dd7251。迈杰转化医学围绕生物标志物研究、伴随诊断开发,建立了完善的核酸组学、蛋白组学、细胞组学技术平台。北京全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导
降低引物的扩增效率,也需要重新设计并合成引物。3、初次复合扩增时,各个引物在反应体系中的浓度均为μm;之后对引物浓度进行调整,获得进行pcr扩增时各个引物的**佳浓度。经过上述步骤,获得引物组合。引物组合由120条引物组成,用于检测68个基因座。各个基因座的名称、扩增基因座对应的引物名称和引物的核苷酸序列依次见表1中第1列、第2列和第3列。进行pcr扩增时各个引物的**佳浓度见表1中第5列。表1各个基因座对应的引物在hg38人类参考基因组(hg38人类基因组的信息见网址./goldenpath/hg38/bigzips/)中的pcr扩增产物的长度和核苷酸序列详见表2。各个str基因座的pcr扩增产物的长度范围分布见图1。表2三、基于二代测序技术检测68个基因座的试剂盒的制备基于二代测序技术检测68个基因座的试剂盒包括引物混合物;引物混合物由步骤二制备的120条引物混合而成。实施例2、实施例1制备的试剂盒检测标准品2800m的str分型及其应用一、实施例1制备的试剂盒检测标准品2800m的str分型1、dna样本准备取标准品2800m,用超纯水稀释,获得浓度为1ng/μl的标准品2800m水溶液。2、pcr扩增以标准品2800m水溶液为模板,采用实施例1步骤三制备的引物混合物进行pcr扩增,得到pcr扩增产物。 天津定制迈杰转化医学NGS平台口碑推荐迈杰转化医学设有病原体检测平台Qiastat-Dx进行呼吸道及胃肠道病原体检测。
PacBio平台技术关键DNA聚合酶,该技术得到的序列读长主要跟DNA聚合酶的活性有关,它主要受激光对其造成的损伤所影响。荧光基团标记在核苷酸3'端磷酸上,在DNA合成过程中,3'端的磷酸键随着DNA链的延伸被断开,标记物被弃去,减少了DNA合成的空间位阻,维持DNA链连续合成,延长了测序读长。ZMW(零模波导孔),将反应信号与周围游离碱基的强大荧光背景进行区分,在一个反应管中有许多这样的圆形纳米小孔,其外径*有100nm,激光从底部打出后不能穿透小孔进入上方溶液区,能量被限制在一个小范围里,使得荧光信号*来自这个小反应区域,孔外其它游离核苷酸单体依然留在黑暗中,从而实现将背景荧光降到比较低。PacBio平台技术优势1.近乎完美的一致性和准确性三代测序单碱基错误率虽然很高,但是这种单碱基的错误是随机发生的,因此,对同一段序列测序覆盖多次就能够进行纠错,一般覆盖到10X以上的深度就能达到。2.不存在测序的偏好性因为SMRT技术在样本制备时无需PCR扩增,对于某些具有极端的碱基组成的核酸区域,三代测序也是无偏好性的,同时也不受回文序列的影响。3.序列准确比对二代测序得到的序列由于长度不够,在进行比对时,会出现很多错误匹配,从而造成假阳性SNP位点。
GC-MS(气相色谱/质谱联用仪)GC-MS简介GC-MS是气相色谱-质谱联用技术的简称,是将气相色谱仪与质谱仪通过适当接口相结合,借助计算机技术,进行联用的分析技术。GC为气相色谱,流动相为惰性气体,多为氦气,由进样口、色谱柱和检测器三部分构成;MS为质谱,由离子源、滤质器、检测器三部分构成,广泛应用于纯物质鉴定。GC-MS因其具有GC的高分辨率和MS的高灵敏度,被广泛应用于复杂组分的分离与鉴定,是生物样品中药物代谢中定性与定量的主要工具。应用领域代谢组学分析药物分析结构鉴定生物组织蛋白分析物质组分鉴定检测示例技术流程送样须知血清、血浆≥尿液≥动物组织≥250mg样本寄送地址:天津经济技术开发区第十三大街37号逸夫楼225,降老师(收)(具体样本保存与运输条件请与我们联系)我们的优势1、提供各种实验材料和仪器,满足项目课题实验需要。2、专业的操作人员。3、高规格实验室。4、数据结果交付周期快。5、完善的服务体系,全程跟进,确保满意。咨询与订购感谢您选择我们的服务,如果您有任何问题,请联系我们,我们将竭诚为您解答和服务。客服电话:网站:邮箱:market@QQ:一、测序策略:提取样品的基因组DNA,检测基因组DNA的完整性和浓度。迈杰转化医学有多年的药企服务经验,紧跟药物研发趋势,熟悉新药研发动向。
thermofisherscientific)等。研究发现,基于pcr-ce分型时,相同片段长度的等位基因中存在重复区域序列结构不一致的情况。二代测序技术(secondgenerationsequencing,sgs)又称为下一代测序技术(nextgenerationsequencing,ngs),具有测序通量高、速度快的优点。ngs不仅能从长度多态性上对str基因座进行分析,还能从序列上发掘str基因座的遗传多态性。随着ngs测序成本越来越低、测序读长逐渐的增加,ngs对str分型技术也越来越成熟。近年来,ngs技术已经应用于法医学str分型研究。相比于pcr-ce分型,ngs技术在y-str基因座的分析中具有很多优势:1、样本输入量低,使得微量样本及降解样本检材的分型研究变为可能;2、准确性高,能够全部覆盖基因座的每个碱基并通过产出高测序深度保证y-str基因座各等位基因的高概率精确判断的严谨性;3、能够获得y-str等位基因间的核苷酸差异信息,由于**重复结构存在差异或扩增区段内存在变异(侧翼序列的碱基突变或插入缺失),序列长度相等的等位基因可能是具有遗传稳定性的完全不同的等位基因,这种y-str序列多态性是个体识别分析的宝贵资源;4、成本低,通过对每个样本检材添加标签一次可以同时对多个样本进行平行测序。迈杰转化医学具体包括全套的Leica组织样本制备系统,Ventana、Leica、DAKO等全自动免疫组化仪。天津定制迈杰转化医学NGS平台口碑推荐
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02FGFR通路的异常调控FGF/FGFR通路的异常调控由多种因素介导,包括:基因改变(扩增、突变和染色体易位);自分泌和旁分泌信号;血管生成以及上皮间质转化(EMT),进而促进细胞增殖、上皮间质转化和血管生成,并推动**的发***展、侵袭、转移等(图2),其中主要的三种调控途径为:a.FGFR基因扩增导致的蛋白过表达;b.***性突变,该突变通常会导致配体亲和力的提高或受体二聚化的增加及活化(配体不存在的情况下),或激酶结构域的组成性***;c.由染色体易位导致的基因融合。图2FGFR异常调控的致*机制[5]图2FGFR异常调控的致*机制[5]03FGFR异常形式以及在不同**中的分布FGFR常见变异形式包括基因扩增/过表达、***突变、基因融合等,此外还有重排、激酶结构域重复及自分泌***等。FGFR的异常表达已在多种实体瘤肿中检测到,如过表达常发生在肺*、脑*、头颈*、前列腺*等,融合常发生在骨髓增生综合征、T细胞淋巴瘤、膀胱*和肝内胆管*等(表1)。北京全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导
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