2015年一项针对4853例各类实体瘤NGS研究表明，FGFR的功能异常发生于7.1%的**样本中，其中基因扩增、基因突变以及染色体重排分别占比为66%、26%及8%，FGFR1、FGFR2、FGFR3及FGFR4在发病患者中占比为3.5%、1.5%、2.0%及0.5%。发生率较高的**有尿路上皮*、胆管*、乳腺*、子宫内膜*、鳞状上皮*等，同时，在肺*、肝*等**中也发现了FGFR的异常***（图3）。图3各类实体瘤中FGFR突变频率[1]04FGFR抑制剂研究现状FGFR抑制剂有望成为泛*种靶向***的新选择，所以FGFR靶点在**领域受关注度极高，目前国内多家药企布局FGFR靶向疗法的研究开发（表2）。表2中国的FGFR抑制剂研发现状05FGFR抑制剂生物标志物研究FGFR抑制剂获批和在研药物，以及相应的临床试验生物标志物研究总结如表3。表3FGFR抑制剂及临床试验生物标志物[7-9]检测FGFR基因变异包括融合，浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台技术指导、重排、扩增和点突变以及其配体的过表达等，涉及DNA、RNA和蛋白质表达等多个生物学层面，检测方法主要有NGS，qPCR，浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台技术指导，浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台技术指导，FISH，IHC以及RNAscope等（表4）。迈杰转化医学具有多年伴随诊断服务经验,获得CNAS国际实验室认可,美国CAP认证。浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台技术指导

    h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系的应用，可为(h1)-(h5)中的至少一种：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。上述任一所述68个基因座具体可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10和y-gata-h4组成。其中，amelogenin为性别决定基因座。dyf399s1包含三个分型片段。dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b和dys527a/b均包含两个分型片段。本发明提供的试剂盒可以检测68个基因座。 福建全平台迈杰转化医学NGS平台来电咨询迈杰转化医学设有病原体检测平台Qiastat-Dx进行呼吸道及胃肠道病原体检测。

    下游的引物IP用于第二轮多重PCR。具体的建库过程是：步骤1，将样本DNA进行片段化处理，随后每个片段两端加上特殊的接头；步骤2，加入***轮扩增的上游引物混合池，与特殊接头互补的通用引物，配制成PCR总体系，进行***轮扩增；步骤3，将***轮PCR产物纯化后，加入第二轮扩增的下游引物混合池，与第二步中使用过的特殊接头互补的通用引物配制成PCR总体系，进行第二轮扩增；步骤4，将第二轮PCR产物纯化后，配置反应总体系，进行Q-PCR定量，稀释到合适的浓度，即可用于二代测序。上述技术方案中，作为推荐，步骤2中，***轮特异性引物是普通的PCR扩增引物，共20个左右的碱基，Tm值设定在60℃，序列根据目标区域设计得到，多个引物混成一个OP引物池做为***轮PCR的上游引物。PCR总体系为：2倍PCRMix35uL，10umol/LP71uL，1umol/LOP1uL或OP2uL，DNA25uL。上述技术方案中，作为推荐，步骤3中，第二轮特异性引物是普通的PCR扩增引物，在其5’端加上测序接头5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’共80个左右的碱基，其中根据目标区域设计得到的序列长度是20个碱基左右，Tm值设定在60℃，多个引物混成一个IP引物池做为第二轮PCR的上游引物。

    不同的二代测序平台的区别主要体现在测序反应的技术上，这些差别可以分为4类：焦磷酸测序，合成法测序，连接法测序和离子半导体测序。焦磷酸测序在焦磷酸测序中，测序反应通过每个核苷酸结合过程中释放的焦磷酸来调控。释放的焦磷酸参与了一系列化学反应从而导致链光的产***出的光由记录基因蔟相应序列的相机来检测。测序反应开始后，先一次孵育一个碱基，测量光发射情况（如果有的话），在降解未参与反应的碱基，***加入另一个碱基。这项技术能够产生较大的读取长度，已经可以与Sanger测序法得到的读取长度相比较。然而，高昂的试剂花费，和有6个或以上的均聚物会产生的高错误率阻碍了这个技术的应用。合成法测序合成测序法是使用可逆荧光和终止核苷酸的分步整合的方法进行DNA测序，并已被llluminaNGS平台使用。首先在测序芯片中同时加入四种核苷酸，核苷酸结合之后，剩余的DNA碱基就会被洗涤去除。每个基因蔟中荧光信号被读取和记录之后，这个过程一直重复直到测序反应完成。这个系统能通过一次只结合一个核苷酸来克服焦磷酸测序的缺点。然而，当测序反应进行时，仪器的错误率也在增加。这是因为去除不完全的荧光信号会导致更高的背景噪声。 迈杰转化医学致力于解决创新药物的研发痛点及患者的用药痛点，助力精z准医疗！

    ⑦侧翼序列碱基数，各部分之间用tab键隔开。按照这种格式依次对68个基因座进行录入。68个基因座基因配置文件录入完成后，运行***。该文件给出了①基因座名称，②基因分型，③扩增子碱基数，④扩增子序列信息，⑤测序深度五个部分。根据国际法医遗传学会(internationalsocietyforforensicgenetics，isfg)发表的关于y-str基因座的str序列指南()和niststr数据库(strbase.)y染色体str情况说明对67个y-str基因座的序列构建**重复结构。实验结果见表3。结果表明，标准品2800m得到了完整的str分型，完全能够满足法医str检验的要求。表3-1注：n与其后数字表示一段碱基序列，其后数字表示序列的碱基数目。表3-2注：n与其后数字表示一段碱基序列，其后数字表示序列的碱基数目。二、采用实施例1制备的试剂盒的应用——口腔拭子样本的基因座分型样本一、样本二和样本三为3名汉族男性无关个体的口腔拭子的基因组dna，浓度均为1ng/μl。3名汉族男性均知情同意。将步骤一中的标准品2800m水溶液替换为样本一、样本二或样本三，其它步骤均不变。检测结果见表3。结果表明，样本一、样本二和样本三均获得了完整的str分型结果。 迈杰转化医学与全球品牌药企广f泛展开伴随诊断产品的开发合作，已有多个诊断产品上市。福建全平台迈杰转化医学NGS平台郑重承诺

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    包括67个y-str基因座和1个性别决定基因座amelogenin)。相比于illumina公司的forenseqtmdnasignatureprepkit，本发明提供的试剂盒中包含41个新的y-str基因座，能提供更多新的遗传信息。而且本发明提供的复合扩增体系中所有y-str基因座的**大扩增子长度都小于300bp，而forenseqtmdnasignatureprepkit中有约％(7/24)基因座的**大扩增子长度大于300bp，不利于降解检材的分析。本发明提供的试剂盒是本发明的发明人经过大量实验摸索获得的，试剂盒中的引物具有不可替换性；即引物被替换后，部分基因座将会被抑制且抑制效果不可预知。实验证明，采用本发明提供的试剂盒检测标准品2800m中68个基因座的str分型，分型结果准确。本发明具有重要的应用价值。附图说明图1为67个y-str基因座的pcr扩增产物的长度范围分布。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。标准品2800m为promega公司的产品，产品目录号为dd7251。 浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台技术指导

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