使用RFect系列小核酸转染试剂做siRNA/miRNA转染测实验注意事项：1.细胞接种：一般做转染前现在接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%；如果细胞是原代细胞，接种密度可以密一些，细胞计数在2*10^6cell/ml；悬浮细胞可以在转染当天接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），待细胞状态稳定后做转染前细胞密度30-40%。2.为了能在使用时有较好的转染效果，靠前次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试剂即可。将较佳转染条件（siRNA与转染试剂的用量、比例）放大到对应的孔板即可。尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。苏州正规原代细胞分离试剂盒厂家

原代细胞培养注意事项：1.收到细胞时，要镜下观察是否有污染情况；收到细胞的前几天，要做好各种倍数的镜下拍照记录，以防细胞出现问题后，可以跟公司很好地沟通。2.收到细胞后，不要马上处理。应置于培养箱中静置4h以上再操作。如果不着急，可静置过夜。3.细胞的靠前次传代，一定要密度高一些传代，原代细胞传代密度低，很难长起来。建议1:2-1:3传代。4.原代细胞传代时（内皮细胞，贴壁为例），0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培养箱内消化30sec，再加入5ml培养基（正常消化贴壁细胞，我们使用胰酶和培养基的量是1:1，但是原代细胞必须用大量培养基中和胰酶）。5.原代细胞不建议冻存，因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话，建议在P2或P3代冻存，冻存液中的血清越多越好，建议比例9（血清）:1（DMSO）。6.原代细胞复苏时，置于37-38度水浴融化细胞，并加入10ml培养液（正常贴壁细胞复苏时，也可以使用这种比例，复苏成活率会较大提高），离心重悬铺板。苏州原代细胞分离试剂盒能够进行悬浮培养的细胞，其生命力一般都比较旺盛。

原代细胞与细胞系：永生化细胞系通常具有更快的倍增时间并可持续地分裂，为实验提供一致的研究工具。然而，每次分裂都会引起遗传漂移，降低了它们的生物学相关性。其优点在于，当需要相同的遗传背景时，可以从一个细胞系产生整个克隆群体以具有相同的基因型。但是，哺乳动物原代细胞是生命科学研究中不可或缺的一环，因为它们在生理上类似于供体组织并保留其天然异质的基因组成。它们具有体内组织特异性特征并且纯度高，因此，除了应用于大规模药物筛选，越来越多地用于更可靠地研究生命科学，例如细胞代谢，信号传导，和衰老等。

取材的基本要求和注意事项叙述如下：一、取材的基本要求（1）取材要注意新鲜和保鲜新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在除去表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内4℃存放，但时间不能超过24h。对于已切碎的组织或血液、淋巴组织应加入含10%二甲基亚砜的培养基，按细胞冻存方式于液氮中冷冻保存。（2）取材应严格无菌所取标本材料应在无菌条件下进行，为了确保无菌，对所取材料若疑有污染的可能，应将所取组织在含高浓。较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质。

原代细胞培养之取材：取材作为原代细胞培养过程中的靠前部至关重要，以下几种取材技术，你都用过哪些方法呢？各类组织取材，操作及注意事项：1.皮肤和粘膜主要取皮片，面积一般2~4平方厘米。2.内脏和实体瘤：1）无菌环境；2）熟悉所需组织的类型和部位；3）要避开破溃、坏死液化部分，以防污染，尽量去除混杂的结缔组织。3.血液细胞一般多抽取静脉外周血，或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞，取材时应注意抗凝。4.骨髓、羊水、胸/腹水细胞严格无菌，注意抗凝，还要尽快分离培养，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。体外分裂增殖的速度较快，营养成分消耗大，换液时间隔一般较短。苏州原代细胞分离试剂盒

将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。苏州正规原代细胞分离试剂盒厂家

原代细胞的培养条件：静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养：a.细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性。b.细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L。c.培养基可用Eagle(MEMCorning10-010-CVR)或DMEM(Corning10-013-CVR)培养。d.胎牛血清浓度为10%-80%。e.应在37℃5%CO2的培养箱中培养。f.在起始的2天中尽量减少振荡，以防止刚贴壁的细胞发生脱落，漂浮。g.待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状，应将原代细胞换液。h.用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时，应将细胞悬液经低速离心后换液。苏州正规原代细胞分离试剂盒厂家

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