实验内容包括:a.单次给药毒性试验(啮齿类) b.多次给药毒性试验(啮齿类,28天、90天,天津重组人源Claudin18.2蛋白,天津重组人源Claudin18.2蛋白、180天等) c. 局部毒性试验 1)血管刺激性试验 2)眼刺激性试验 3)肌肉刺激性/植入试验 4)黏膜刺激性试验(鼻腔、口腔,天津重组人源Claudin18.2蛋白、直肠、阴道黏膜等) 5)皮肤光毒试验 6)皮肤刺激性试验(急性、多次) 7)皮内刺激性试验 d. 免疫原性试验 1)主动全身过敏性试验 2)被动皮肤过敏性试验 3)Buehler 试验 4)溶血性试验 5)皮肤***反应试验 e. 安全性药理试验 1)自发活动试验 2)爬杆试验 3)转棒试验 f. 遗传毒性试验 1)鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ame’s) 2)体内骨髓微核试验 3)微核组学试验(CBMN) 4)体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 5)骨髓细胞染色体畸变试验 6)精原细胞染色体畸变试验 7)精子畸形试验 8)体外哺乳动物细胞基因突变试验(TK) g.毒代动力学试验 h. 致畸试验.
而该抗体与其余组织无明显结合。所以,本发明所提供的产品的安全性高。用Ni亲和柱层析获得,采用梯度的方法将纯化得到的溶液复性,故制备方法易行。四图1是重组表达质粒,目的片段大小约220bp(TT+);图2是,其中1:分子量蛋白质标准(**下面一条10000Da),2:未诱导,3:诱导后的,4:裂菌沉淀,5:裂菌上清,6:纯化后,7:复性后的;图3,其中1:未诱导,2:诱导后的rhClaudin,3:裂菌沉淀,4:裂菌上清,5:纯化后,6:复性后的;图4,其中1:MFC,2:MPC-83,3:胰岛细胞*组织裂解液,4:KATOIII,5:PANC-1;图5荷瘤小鼠抑瘤率,其中MFC为胃*组(黑色为(:1肌^,白色为生理盐水对照组),MPC-83为胰腺*组(黑色为,白色为生理盐水对照组)。五具体实施例方式为了更清楚的理解本发明,以下结合发明人完成的实施例对本发明作进一步的详细描述。以下结合附图和实施例对本发明作进一步的详细描述。一、本发明所提供的重组人(),其氨基酸序列为HMKSSQYIKANSKFIGEFDQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGLWRSCVRESSGFTECRGYFTLLGLPAMLQAV二、上述重组人()制备方法,依次包括以下步骤(1)按照GeneBank中人***个胞外区基因序列,采用RT-PCR常规方法,上游引入fcoRI酶切位点,下游引入酶切位点获得***表位。
许多证据表明,存在于**组织中的特异性活化T淋巴细胞可发生凋亡。将体外活化的肿瘤特异性T淋巴细胞输入**组织后,其杀伤活性消失。这些现象都说明在**微环境中存在着保护肿瘤细胞的免疫逃逸机制。同时,还有许多具有免疫***功能的可溶性因子(TGF-0、IL-IO、前列腺素E2、Fas、TRAIL和RACS1等)和细胞膜分子(CTLA4、B7-H1等)在肿瘤细胞表达上调。因此,研究**组织内有关针对免疫攻击的逃逸机制对于提高**疫苗的***效果具有重要意义。1、Claudins家族蛋白在**中的表达及其研究现状紧密连接是细胞黏附形式的一种,主要存在于上皮细胞、内皮细胞间的连接复合体中。它可维持机体内环境的稳定,保持上皮细胞的极性,影响细胞的运动、增殖、分化,调节细胞功能的发挥。紧密连接分子由Occludin,Claudins和连接黏附分子(Junctionaladhesionmolecules,JAMs)3种完整的膜蛋白和闭合小环蛋白(ZO-l,ZO-2和ZO-3)等外周胞浆蛋白组成,但对于它们的功能及其调节目前研究尚少。近年已证实Claudin蛋白是构成紧密连接的骨架蛋白,其异常表达可导致上皮细胞、内皮细胞结构破坏、功能受损,可能在多种疾病的发病过程中起重要作用。到目前为止,已发现Claudin基因家族包括24个成员。
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