实时荧光定量PCR在病原微生物检测中的应用

实时荧光定量PCR是通过荧光信号监测目的基因扩增数量的定量PCR技术,具有灵敏度高,检测速度快等优点。实时荧光定量PCR已被应用于乙肝病原微生物、登革热病原微生物、流感病原微生物、水疱口炎病原微生物等病原微生物的快速检测,在病原微生物快速分型、相似病原微生物的鉴别检测，天津**基因荧光定量PCR分析服务、耐药病原微生物突变体检测等临床和公共卫生领域得到广泛应用。狂犬病是危害严重的**共患病,病死率几乎为。实时荧光定量PCR技术已被应用于狂犬病病原微生物和狂犬病相关病原微生物的核酸检测，天津**基因荧光定量PCR分析服务,具有与金标准DFA相当的灵敏度和特异度,同时克服了金标准DFA的某些局限性,如检测速度更快,无需提取脑组织,对唾液、脑脊液等低病原微生物载量样本具有较好的检出效果,具有成为人间狂犬病诊断技术的潜力。灵敏度是传统RT-PCR的200倍以上,交叉污染的风险更低，天津**基因荧光定量PCR分析服务。实时荧光定量PCR也应用于欧洲蝙蝠病原微生物等狂犬病相关病原微生物的检测,可建立多重实时荧光定量PCR在单一检测体系对多种病原微生物进行快速鉴别,对于预防病原微生物性传染病具有重要的公共卫生意义。

在PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸：5’端标记一个报告荧光基团，3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。

在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号**扩增阶段任意位置上，但一般荧光阈值的设置是PCR反应**-15个循环荧光信号标准偏差的10倍。

自从1983年K. Mullis发明聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR)以来，PCR技术很快成为科研、临床诊断的热点技术。

而实时荧光定量PCR技术，顾名思义，就是在PCR的基础上加入荧光基团，通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程，***通过对未知模板进行定量分析的方法。

目前，实时荧光定量 PCR 已成为不同样品间进行基因表达水平定量差异比较的**性方法。在过去十几年中，该方法迅速流行，涉及科学的多个领域，包括农业、环境、工业和医学研究。

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