多光谱成像技术多光谱成像技术,可俗称免疫荧光多标,即将我们常见的免疫荧光双标提高到六标,实现了在同一张组织切片上同时标记3~6种蛋白,解决了科研中经常遇到的标记蛋白种类太少,无法在同一张切片上观察不同细胞或者多种蛋白分布情况的难题。那么多光谱成像技术是什么工作原理,同时又具有哪些更加强大的功能?
多光谱成像技术由多标染色,天津六色免疫组化染色服务、图像采集和图像分析三大模块组成,天津六色免疫组化染色服务。多标染色采用的是Opal/TSA多标记免疫荧光技术,天津六色免疫组化染色服务,打破了常规免疫荧光技术的局限性,不受一抗的种属来源限制,能够在同一组织切片样本上复染多达7种荧光标记(含DAPI在内)。图像采集采用了Vectra全光谱图像采集技术,这是***一代的组织切片成像分析系统,创新性的将光谱成像和切片全景扫描功能完美融合,实现了**性的技术跨越,通过光谱拆分能够去除自发荧光的干扰,有效识别多重荧光信号,从而获得***图像,确保能够进行精细的定量定位分析。
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先的组织标本制作方法。抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
但也存在主次之分,出现问题了,需要通过先排除主要的,再依次排除次要的--这是衡量你对免疫组化原理掌握与否的关键所在。案例三石蜡切片免疫荧光染色呈阴性结果或非特异性结果背景:因实验需要,于2008年07月04日初次做肝脏组织ZO-1(一种胞膜蛋白,紧密连接蛋白)免疫荧光染色,以前我对酶免疫组化非常熟悉,在丁香园子内也有不少置顶贴和精华帖,但免疫荧光一直还没做过(原理知道,但细节不太了解)。我先用石蜡切片做了5次,结果一直不理想(表现为未见特异性强染色);近几日,在舜田生物老师的帮助下,我又切了冰冻切片,做了2次,终于基本成功了。在这个过程中,我对免疫荧光染色技术有了全新的认识,而前些天发出免疫荧光求助贴,回复的很少,所以有必要加强对免疫荧光方面的讨论),不妥之处敬请指正。有人会问酶免疫组化做的好好的,为何要做免疫荧光?其实,这也是我以前思考的难题,现在我认为可能胞膜蛋白含量不高,用普通免疫免疫组化可能做不出来,需要敏感的免疫荧光方法来进行蛋白检测(我是看许多外文文献都是这样做的,因此选择免疫荧光染色。
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