1)动物的选择选择什么动物来免疫取决于：·所需抗血清的量–小鼠只能提供～，而山羊能提供几升。·能供免疫用的抗原量–小鼠50μg足够，而山羊需要几毫克。(1)动物的选择(续)·动物的品系：免疫动物与提供抗原的动物之间的种系差异越大越好。–例如哺乳动物的抗原可选择非哺乳动物来制备抗体。–常用的动物有兔、羊、马、猪等，以兔(新西兰兔，年轻，健壮，体重在，雄性)为**常用。(2)佐剂(adjuvant)·一般可溶性抗原注射后，迅速从注射部位扩散、吸收代谢。佐剂可延长滞留时间，且延长免疫刺激作用。因此在制备抗体的过程中，常将抗原和佐剂一起注射。·**常用的佐剂是弗氏佐剂，又分为：–弗氏不完全佐剂(Freund'sincompleteadjuvant)–弗氏完全佐剂(Freund'scompleteadjuvant)弗氏不完全佐剂(Freund'sincompleteadjuvant，北京五色免疫组化染色服务,FIA)·是由油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂(羊毛脂或Tween80)混合而成，北京五色免疫组化染色服务，北京五色免疫组化染色服务，比例为1:1、2:1、3:1或5:1，可根据需要而定，通常2:1。·使用时与水溶性抗原按1:1比例充分混合，使抗原分散在佐剂中形成油包水乳剂。弗氏完全佐剂(Freund'scompleteadjuvant,FCA)·在弗氏不完全佐剂中加入活卡介苗或死的结核分枝杆菌(终浓度为2～20mg/ml)，即成为FCA。

    –用戊二醛或碳化二亚胺作为交联剂通过功能基团-NH2、-COOH等将半抗原结合到载体上。结合比例为5kDa结合5～25个分子的小肽。免疫细胞化学技术抗体(antibody,Ab)1、抗体的概念：免疫球蛋白·机体受到抗原刺激后，由浆细胞合成并分泌出一类具有与抗原发生特异性结合的球蛋白，被称为抗体。–抗体主要存在于血清内；–抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗体。–免疫球蛋白根据重链的结构及抗原特异性不同分为五种，既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。2、免疫组化实验中常用的抗体：单克隆抗体和多克隆抗体。·单克隆抗体：是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，是应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备的。–特异性强、抗体产量高。·多克隆抗体：是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。–特异性低，会产生抗体的交叉反应。–多克隆抗体广泛应用于石蜡包埋组织切片，可减少假阴性染色机会。–抗原与抗体的结合，要求量保持一定比例，当抗原或抗体过量时，是不能聚合成大颗粒。3、抗体的制备——多克隆抗体的制备·动物的选择·佐剂(adjuvant)·免疫方法·免疫剂量·抗体效价的测定·放血或定期抽血。

    如淋巴细胞表面抗原尤其适合。·组织冻结过程中，细胞内、外的水分会形成冰晶，冻结的速度愈慢，冰晶颗粒愈大，可严重影响组织、细胞的形态结构。因此制备冻块时要求低温、速冻。1、冰冻组织块的常用方法·液氮中冰冻：组织投入液氮中(一196C)中10～20sec；·干冰中加入**(或异戊烷)，液体立即气化起泡，温度降至一70C，将组织投入，若在干冰**中置一盛有异戊烷的容器，组织投入该容器内结冻则更好；–上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内，以保护组织。–制成冻块后若需保存，应以铝箔或塑料薄膜封包，贮存于-70C冰箱。2、切片·供免疫组化用的冰冻切片同样要求附贴平整，并有连续性。·载玻片也应清洁无油污，但一般无需涂抹粘附剂；·切片时，使用恒温冷冻切片机，在箱内温度-25C。切片厚度一般为4～8m。3、切片后处理·切好的冰冻切片，室温下自然晾干1～2h后，入4C**固定10min，待干燥后作免疫组化染色或封存于-20℃。·冰冻切片由于切片技术要求较高，不易得到连续性很好的切片，其形态结构亦不如石蜡片，且冻块和切片不便于长期贮存，因此冰冻切片的应用受限。

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