使用包含 3 种不同浓度的 ROX 染料的预混液对 TGF-β 进行扩增。显示 (A) Ct 值和 (B) 标准差随 ROX 染料浓度的变化。降低 ROX 染料浓度导致 Ct 出现得更早，但是会增大标准差。使用 Applied Biosystems 7500 实时荧光定量 PCR 系统执行所有扩增。

Ct 随 PCR 效率发生变化，北京荧光定量PCR实验技术服务。蓝色标准曲线的效率为 **（斜率为 –3.3）。绿色标准曲线的效率为 78%（斜率为 –4）。与高效率条件相比（蓝色），在低效率条件下（绿色），北京荧光定量PCR实验技术服务，扩增量 Y 使 Ct 出现得更早。较低扩增量 (X) 时则情况相反，北京荧光定量PCR实验技术服务，与高效率条件（蓝色）相比，低效率条件（绿色）使 Ct 出现得更晚。

在使用具有相同 ROX 水平的两种预混液的一次检测中获得的原始荧光数据。信号差异是由预混液的成分造成的。使用 Applied Biosystems™ VIC™/MGB 探针在 Applied Biosystems™ 7900HT 快速实时荧光定量 PCR 系统上执行此反应。x 轴显示荧光基团的的发射波长，y 轴显示发射强度。

任何分子的荧光发射都受环境因素的影响，比如溶液的 pH 值和盐浓度。图 2 显示某个 Applied Biosystems™ TaqMan® 探针在两种不同预混液背景下的原始荧光数据。请注意，尽管两组反应的靶标、探针和 ROX 染料浓度都相同，预混液 A 中的荧光强度更高

一个评估 PCR 效率的关键参数是 R2，它是说明如何使用一个数值预测另一个数值的相关程度的统计学术语。如果 R2 为 1，那么 Y 值 (Ct) 可以用来准确预测 X 值（图7A）。如果 R2 为 0，那么就不能通过 Y 值预测 X 值（图 7B）。R2 值 >0.99 表示两个数值之间相关的置信度良好。

精确度

标准差（偏差的平方根）是**常用的精确度计量方法。如果许多数据点都靠**均值，则标准差就小；如果许多数据点都远离平均值，则标准差就大。

实际上，足够多重复次数产生的数据**形成大致的正态分布。这经常可通过经典的中心极限定理来证明，该定理称大量**同分布随机变量的和在无限多时趋向于正态分布。如图 8A 所示，约 68% 的值在平均值的 1 个标准差之内，约 95% 的值在平均值的 2 个标准差之内，约 99.7% 的值在平均值的 3 个标准差之内。

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