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天津基因表达荧光定量PCR实验技术服务 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

信息介绍 / Information introduction

一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段、荧光信号**扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,天津基因表达荧光定量PCR实验技术服务,无法判断产物量的变化;在平台期,扩增产物已不再呈**级增加,天津基因表达荧光定量PCR实验技术服务,PCR终产物量与起始模板量之间没有线性关系,无法计算起始模板拷贝数。因此只有在荧光信号**扩增阶段,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,天津基因表达荧光定量PCR实验技术服务,故选择在这个阶段进行定量分析。为了定量方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了几个重要的概念:扩增曲线、荧光阈值、CT值。

实时荧光定量PCR技术原理将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。在实时荧光定量PCR中,实时检测全程PCR扩增过程,按照反应时间和荧光信号的变化能够将一条曲线绘制成。混合模板DNA和有荧光素的Taqman探针,遵守聚合酶链反应规律使高温变性,低温复性,适温延伸的热循环完成,切断和模板DNA互补配对的Taqman探针,荧光素在反应体系中游离。荧光在特定光激发下发出,被扩增的目的基因片段随着循环次数的增加呈级增长,Ct值根据实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度求取出来,同时对照多个已知模板浓度的标准品,就能够使待测标本目的基因的拷贝数得出。

荧光定量PCR 技术,是通过在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,对起始模板进行定量分析的方法。实验采用两种定量方式,即***定量和相对定量。荧光定量PCR 可用于mRNA 表达量水平检测、MicroRNA 表达量水平检测和基因拷贝数检测。实验的方法可分为SYBR Green I 法和TaqMan 探针法。


客户提供提供样本

细胞:细胞数>10^6;

组织:总量>100 mg;

DNA 或RNA 样品:总量>2 μg。

可选样本引物:可由客户提供,没有引物的情况下,可由生工生物设计合成

提供信息

靶基因信息:包括基因序列或GenBank Accession Number 等;背景资料:包括生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。**终交付交付报告

实验报告:包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等。


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