RNA/DNA pull-down是检测RNA/DNA结合蛋白与其靶RNA/DNA之间相互作用的主要实验手段之一。用生物素标记RNA/DNA 探针，与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA/DNA—蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过Western Blot实验检测特定的RNA/DNA结合蛋白是否与RNA/DNA相互作用，天津四步9分钟完成RNA提取试剂盒****，还可以对该蛋白进行质谱（MS）鉴定蛋白质类型。

1.根据基因序列进行DNA序列T克隆， 体外转录RNA，天津四步9分钟完成RNA提取试剂盒****，进行生物素标记制备RNA探针或直接合成DNA生物素探针，天津四步9分钟完成RNA提取试剂盒****，3.细胞裂解液制备 ，4.探针与总蛋白裂解液 pull-down互作结合蛋白，5. 对结合蛋白进行纯化与分析（WB及蛋白质谱分析）。

每毫升 Trizol 加入 0.2ml 氯仿，Vortex 混匀或猛烈晃动 15 秒，室温放置 3分钟。

4°C，12000rpm 离心 15 分钟，样品会分成三层：上层无色的水相、中间蛋白层和紫红色的下层有机相。然后吸取含总 RNA 的上层无色水相至一新的RNase-free 的离心管中。

按照每毫升**初的 Trizol 加入 0.5 ml  异丙醇的比例，颠倒数次混匀，室温沉淀 10 分钟，或者-20°C 沉淀 30 分钟，或-70°C 沉淀过夜。【注】如果希望提取microRNA 等小 RNA 时，推荐使用低温长时间的沉淀，来获得比较好效果。

4°C，12000rpm 离心 10 分钟，在管底可见 RNA 沉淀，弃上清。【注】纯度越好的 RNA 沉淀会在管侧和管底形成透明胶质状，不容易看清楚。

细胞中的RNA主要有三类：rRNA约占80％－85％，tRNA和核内小分子RNA约占10%-15%，mRNA约占1%-5%，由于rRNA占绝大多数，因此我们用琼脂糖凝胶电泳可以看到的即是rRNA，它也有三种类型：28S，18S，5S三条带，在RNA的提取时，一定要注意RNase的污染，因RNA极易被RNase的降解，操作时应尽量少说话，并在洁净的环境中操作，主要防止手、唾液和空气中Rnase的污染；另一方面使用的所有玻璃仪器、移液器、吸头和离心管都用0.5%DEPC溶液处理过夜,然后高压无菌15分钟.但对于无菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNase,，可以不经处理直接用于提取RNA，实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有Rnase污染，使用前必须180度干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品），另外，由于材料不同，机体内含有的糖、酚类物质不一样，因此材料不同用的方法也应该不一样。

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