Trizol法提取RNA实验步骤及原理

1.在提取组织RNA时,每50～100mg组织用1mL Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时,先用PBS洗涤/离心沉淀细胞,每5-10 ╳106个细胞加1mL Trizol后, 反复用吹打或剧烈振荡以裂解细胞.

2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中, 在室温15~30℃下放置5分钟；在EP管中,按照每1mL TRIZOL加0.2mL氯仿的量加入氯仿(即为1/5体积), 盖上EP管盖子, 在手中用力震荡15秒(10次), 在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后, 14000rpm（4℃）离心15分钟，北京四步9分钟完成RNA提取试剂盒50T/690元.

【注：离心后分为3层，RNA在上层水相, DNA在中间层, 蛋白质在下层有机相】

3、取上层水相置于新EP管中(～500uL, 用200uL的黄色*头小心吸取, 约吸取3次, 杜绝取到中间层/下层), 按照每1mL Trizol加0，北京四步9分钟完成RNA提取试剂盒50T/690元.5mL异丙醇的量加入异丙醇(即为1/2体积), 4℃下静置20分钟, 沉淀RNA；14000rpm（4℃）离心15分钟.

4，北京四步9分钟完成RNA提取试剂盒50T/690元、按照每1mL TRIZOL加1mL75%乙醇进行洗涤(即为1倍体积, 注:用DEPC水配置75%乙醇), 混合(#用移液器轻轻吹打即可,不用将沉淀打碎), 14000rpm（4℃）离心20分钟, 弃上清(#比较好用真空泵吸去上清)；让沉淀的RNA在室温下自然干燥(#或在超净台中小风吹干,比较好置于干净的环境中，防止灰尘杂质进入)；用45uL Rnase-free water 溶解RNA沉淀.

. 样品处理a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟， 10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。

本实用新型公开了RNA提取试剂盒，涉及生物技术领域。本实用新型包括盒盖和盒体，盒体为圆柱形结构，盒体内通过横板分隔为试剂腔和容纳腔，试剂腔内设有试剂存放盒，试剂存放盒内设有固定层，固定层上均匀开设有若干个与试剂瓶相配合对应的容器孔，固定层上设置有与容器孔相配合对应的标签槽，标签槽中设置标签，容纳腔内设有***抽盒和第二抽盒，***抽盒滑动设置在盒体内，第二抽盒滑动设置在盒体内，***抽盒为工具箱，第二抽盒为试剂箱，盒盖一表面设有提手。本实用新型通过设计圆柱形结构的盒体，盒体内置倾斜的固定层和相对应的标签槽以及提手结构，解决了现有的试剂盒空间利用率不高，试剂管容易混淆，不易携带的问题。

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