Trizol法提取RNA实验步骤及原理

1.在提取组织RNA时,每50～100mg组织用1mL Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时,先用PBS洗涤/离心沉淀细胞,每5-10 ╳106个细胞加1mL Trizol后, 反复用吹打或剧烈振荡以裂解细胞.

2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中, 在室温15~30℃下放置5分钟；在EP管中,按照每1mL TRIZOL加0.2mL氯仿的量加入氯仿(即为1/5体积), 盖上EP管盖子, 在手中用力震荡15秒(10次), 在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后, 14000rpm（4℃）离心15分钟.

【注：离心后分为3层，上海9分钟完成RNA提取试剂盒QQ 804036498，上海9分钟完成RNA提取试剂盒QQ 804036498，RNA在上层水相, DNA在中间层, 蛋白质在下层有机相】

3、取上层水相置于新EP管中(～500uL, 用200uL的黄色*头小心吸取, 约吸取3次, 杜绝取到中间层/下层), 按照每1mL Trizol加0.5mL异丙醇的量加入异丙醇(即为1/2体积), 4℃下静置20分钟, 沉淀RNA；14000rpm（4℃）离心15分钟.

4、按照每1mL TRIZOL加1mL75%乙醇进行洗涤(即为1倍体积, 注:用DEPC水配置75%乙醇), 混合(#用移液器轻轻吹打即可,不用将沉淀打碎)，上海9分钟完成RNA提取试剂盒QQ 804036498, 14000rpm（4℃）离心20分钟, 弃上清(#比较好用真空泵吸去上清)；让沉淀的RNA在室温下自然干燥(#或在超净台中小风吹干,比较好置于干净的环境中，防止灰尘杂质进入)；用45uL Rnase-free water 溶解RNA沉淀.

向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。

向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。

12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。

将吸附柱放入新管中，向膜**滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA

所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

通用RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品，提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度，同时通过可在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA，而各种蛋白质和其他杂质均可被去除掉对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力，得到的RNA 纯度更好，质量更高。该试剂盒可从各种细胞或组织中快速提取总RNA，每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×106 细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染，可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

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