免疫组织化学是一项在医学基础与临床科研中被广泛应用的一项技术,免疫组化染色服务也是生物公司的一项常规服务之一。该技术融合了抗原和抗体特异性结合的免疫学技术与组织学技术,通过化学反应使标记抗体的显色剂显色,来对组织或细胞内抗原进行定位和定量研究。肽类、***、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等,它们的组织细胞内具有抗原性的物质,所以均可以用免疫组织化学方法显示。免疫组化常用的显色剂包括荧光素、酶,天津五色免疫组化检测服务、生物素和铁蛋白等。11、金属离子和金属蛋白复合物
金属离子和金属蛋白复合物如铁蛋白、金和汞可以作为免疫组化反应中的标记物。如铁蛋白等,主要应用于免疫电镜。免疫金银法的基本原理是用特异性抗体与抗原反应,随后用金标记的间接抗体或SPA蛋白,再与特异性抗体结合,天津五色免疫组化检测服务,用乳酸银处理,使银颗粒沉积在金颗粒上,还原银反应而显示出黑褐色。适用于石蜡切片、冰冻切片,天津五色免疫组化检测服务,培养细胞,细胞涂片和树脂包埋的电镜切片。这种方法敏感性高,可检测组织中微量抗原,定位准确、无扩散现象且背景清洗,对比度好、方法简便。
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先的组织标本制作方法。抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
在放入氨水中返兰即可。13)封片为了长期保存,我们一般用中性树胶等封片,避免产生气泡,方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液,然后一手拿住盖片某一拐角,而另一手拿对面的那个拐角,接近封片液近端的拐角先降低,直至接触到液体时为止;当发现液体接触面在不断弥散时,则可以缓慢降低另一拐角,这样一般不会产生气泡。2、免疫荧光方法中的重要环节1)冰冻切片制备建议用新鲜组织,否则组织细胞内部结构破坏,易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等,防止裂片和脱片严重。2)组织切片固定切好片风干后立即用冰**等固定液进行固定5-10min,尤其要较长时间保存的白片,一定要及时固定和适当保存。3)血清封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合,需要在一抗孵育前先用血清(与二抗来源一致)封闭,减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的,一般10-30min。4)一抗孵育条件在免疫组化反应中**重要,包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种:4℃、室温、37℃,其中4℃效果比较好;孵育时间:这与温度、抗体浓度有关,一般37℃1-2h,而4℃过夜和从冰箱拿出后37℃复温45min。具体条件还要摸索。5)二抗孵育条件二抗一般室温或37℃30min-1h。
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