但也存在主次之分，出现问题了，需要通过先排除主要的，再依次排除次要的--这是衡量你对免疫组化原理掌握与否的关键所在。案例三石蜡切片免疫荧光染色呈阴性结果或非特异性结果背景：因实验需要，于2008年07月04日初次做肝脏组织ZO-1（一种胞膜蛋白，紧密连接蛋白）免疫荧光染色，以前我对酶免疫组化非常熟悉，在丁香园子内也有不少置顶贴和精华帖，但免疫荧光一直还没做过（原理知道，但细节不太了解）。我先用石蜡切片做了5次，结果一直不理想（表现为未见特异性强染色）；近几日，在舜田生物老师的帮助下，我又切了冰冻切片，做了2次，终于基本成功了。在这个过程中，我对免疫荧光染色技术有了全新的认识，上海多标记免疫组化技术服务，而前些天发出免疫荧光求助贴，回复的很少，所以有必要加强对免疫荧光方面的讨论），不妥之处敬请指正。有人会问酶免疫组化做的好好的，为何要做免疫荧光？其实，上海多标记免疫组化技术服务，这也是我以前思考的难题，现在我认为可能胞膜蛋白含量不高，上海多标记免疫组化技术服务，用普通免疫免疫组化可能做不出来，需要敏感的免疫荧光方法来进行蛋白检测（我是看许多外文文献都是这样做的，因此选择免疫荧光染色。

    我身边有个研究生同学在我们实验室初次涉入免疫组化，听说步骤不难，跟我后面做了几次之后，就自己开始做了，连续做了三次，结果均是阴性染色。很扫兴，不知是什么原因导致的，后来我还是请教了上海舜田生物老师，她**提供给我我很大的帮助，解决问题的思路也逐步清晰。问题及其解答：免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液，怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果？另外，不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索比较好浓度。2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是比较好的时间和次数。若不行，还可高压修复。3、组织切片本身这种抗原含量低；4、血清封闭时间过长。5、DAB孵育时间过短。6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。7、开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。我的实际解决方案：1、首先，排除组织切片内的抗原有无丢失及其含量多少。免疫组化中两个**重要的因素是抗原和抗体。

多重荧光免疫组化与显色法多重免疫组化不同，多重荧光免疫组化（mIHC）是基于酪胺信号放大（ Tyramide Signal Amplification，TSA）技术，可实现在同一组织切片样本上对多个靶标进行区别标记，进而分析组织微环境中蕴含的复杂信息。 多靶标组织原位的定位，半定量分析，数据更有价值高清共染图片，助力高水平文章发表大幅提升低丰度蛋白的检出几率节省抗体用量，节约宝贵时间同一来源种属抗体的多重标记，无需更换经典克隆节约珍贵样本，小切片提供大信息。

免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。