在这项新的研究中，这些研究人员以体外培养的基因组工程细胞为实验对象研究了永生化过程，而且当皮肤细胞从痣进展为恶性黑色素瘤时，也追踪了它们，结果提示着端粒酶在**中起着更为复杂的作用。

论文通信作者、加州大学伯克利分校分子与细胞生物学助理教授Dirk Hockemeyer说：“我们的研究结果对如何考虑促进**产生的**早过程和将端粒酶作为zhiliao靶点产生影响。这也意味着端粒生物学在**产生的早期阶段发挥的作用已被极大地忽视。我们在黑色素瘤中的发现很可能也适合其他的**类型，这也就意味着人们会更加仔细地研究较早的端粒缩短作为一种**yizhi机制所发挥的作用，天津HPV法细胞永生化构建服务。”

从痣到**

Hockemeyer、他在加州大学伯克利分校的同事们与加州大学旧金山分校皮肤病理学家Boris Bastian及其同事合作，发现细胞永生化是一个两步骤过程，**初由jihuo端粒酶的突变引起，天津HPV法细胞永生化构建服务，但这种jihuo水平较低。该突变位于端粒酶基因上游的一个启动子（被称作TERT），天津HPV法细胞永生化构建服务，该启动子调节着端粒酶的表达水平。四年前，已有人报道过，大约70％的恶性黑色素瘤在TERT启动子中具有这种相同的突变。

    很容易使细胞转化为肿瘤细胞。02端粒酶***端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖**白酶，由RNA和蛋白质组成。端粒酶能以自身的RNA为模板，从端粒DNA3’-OH末端延伸端粒或合成新的端粒DNA，以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，从而维持端粒的长度，使细胞不会因端粒耗尽而出现凋亡。正常情况下，大多数体细胞端粒酶的表达是严格调控的，表达是瞬时和低水平的。在原代培养的细胞中稳定表达人端粒酶催化亚基(hTERT)基因能稳定端粒的长度，使细胞易于永生化，因此hTERT的***是细胞永生化的重要步骤。虽然***端粒酶活性能够使多种人和动物的细胞永生化，但是对于有些细胞，重建端粒酶活性并不足以使细胞永生化，还需要借助*基因法。03*基因法一些原*基因，如Myc,c-Jun,c-Ias,vsrc和Mdm2，通过基因转染可介导目的细胞永生化。c-Myc是**早被发现的原*基因，有许多与瘤化相关的功能区域，其转录表达的蛋白通过核膜进入细胞核与端粒酶的启动子结合位点特异性结合，诱导端粒酶mRNA快速表达，直接***端粒酶活性，促进细胞进入永生化。细胞永生化过程中，抑*基因如p53,pRb,BRCA1,DPC4等，通过等位基因隐性作用、抑*基因的显性负作用等逐渐失去活性，细胞老化途径受阻。

    建立人卵巢*永生化细胞系,为卵巢*体外研究提供实验模型。方法利用基因重组技术构建猴肾virus40(SV40)T抗原基因的gaoxiao真核表达载体pcD2SV40。将其转染10例原代培养的早期传代细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系。免疫组化检测细胞的上皮起源,用PCR、RTPCR和SouthernBlot方法鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达。观察所建立的永生化细胞系的染色体核型。结果10例转染细胞中,6例筛选出抗性克隆。角蛋白免疫组化证实3例为上皮起源。其中2例上皮起源细胞得以扩大培养成系,长期稳定传代,分别命名为BUPH:OVSC2和BUPH:OVCA3。经鉴定两种细胞系中存在SV40T在基因水平及转录水平的表达。其染色体核型均符合人体恶性细胞特征。结论利用SV40T抗原基因进行人卵巢*原代细胞的永生化是一种可行的、可重复的建系方法,可提高卵巢*细胞成系机率。

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