收集蛋白样品(Protein sample preparation)

可以使用适当的裂解液，Western及IP细胞裂解液，北京微量蛋白Western Blot检测服务、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞，北京微量蛋白Western Blot检测服务、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞**白，北京微量蛋白Western Blot检测服务、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒

全自动western  blot无需凝胶、无需转印，放入您的样品，按个按钮，然后就没事了。首先，将样品与Simple

Western样品缓冲液混合，至终浓度1 μg/μL，还原并变性，然后将制备好的样品、一抗和二抗、化学发光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后，将Simple

Western分析缓冲液、毛细管和制备好的分析板放入Simon内，它自动开展所有分析步骤。当蛋白沿着毛细管内一个堆积和分离基质迁移时，它们分离。分离后的蛋白固定到毛细管壁上。之后利用一抗鉴定目标蛋白，用HRP结合的二抗和化学发光底物检测蛋白。系统自动报告检测蛋白的分子量和信号。每次实验可同时分析**多12个样品，结果可在3-5小时内获得。15-150 kDa的目标蛋白均可检测。软件报告每个检测蛋白的分子量、面积、面积百分比和信噪比。对于传统的Western blot而言，结果的重复性一直是个挑战，因为缺乏标准化的操作，且多个操作步骤引入了实验可变性。而Simple Western分析是完全自动化的，因此结果的重复性更好。整体的定量也**改善了，因为省去了转印步骤，从而避免了蛋白转移的不一致。

全自动单细胞western blot检测分析原理：全自动单细胞western blot分析是单细胞水平，蛋白质表达定量分析系统。系统采用**的微流控western blot芯片，通过单细胞微孔设计，采集单细胞，然后原位裂解细胞，释放蛋白，进行蛋白质电泳，将不同分子量蛋白进行分离，提高免疫学检测特异性。之后，采用**技术进行蛋白质原位捕获，使用western blot验证抗体及荧光标记二抗直接杂交，扫描仪进行芯片扫描后，分析软件对扫描结果进行深度定量分析。

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