操作方法20包被先取96孔ELISA板，将(ug/ml),按100nL/孔加入板孔中，4t:包被过夜；倒掉包被液，加入封闭液，室温下封存2h;弃去封闭液，上海销售人源Claudin18.2蛋白质量放心可靠，用洗涤液洗6次，每次2min;分别加入倍比稀释的山羊抗人(500ixg/ml)和抗血清，100pL/L，室温下孵育lh;弃去抗体和抗血清，用洗漆液洗6次，每次3min;加入HRP标记的抗山羊二抗，100uL/孔，室温孕育lh;弃去二抗，用洗涤液洗6次，每次3min;加入底物显色液，100uL/L，室温，显色10-20min;加入终止液，50uL/孔，终止反应；酶标仪读数，测定没孔在490nm的吸光值。(3)免疫印迹反应测定血清抗分别取人胃*KATOin和胰腺*PANC-1细胞以及小鼠胃*MFC和胰腺*MPC-83细胞按照，结束后，按Bio-Rad产品说明，凝胶靠近阴极一侧，硝酸纤维膜(NC膜)靠近阳极一侧，置转移缓冲液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇)，100V恒压lh,将蛋白从凝胶电转移至NC膜上，电转移结束后，取出NC膜，用洗涤液TBST(含mol/LTBS、Tween20)室温洗3次，浸入封闭液(含2%BSA的TBST)中37'C，1h，洗涤液(TOST)室温洗3次，加荷瘤小鼠抗血清，37。C孵育1h，TBST室温洗膜3次，加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司)，上海销售人源Claudin18.2蛋白质量放心可靠，上海销售人源Claudin18.2蛋白质量放心可靠，37。C孵育lh，TBST室温洗膜3次，再用TBS洗3次。

    Claudin蛋白作为细胞表面蛋白，是一个可以应用于多种***策略的靶点。图，在正常的组织中*表达在分化的胃粘膜上表皮细胞上，不表达在胃干细胞上。在原发性胃*及其转移后**类型中大部分都表达，另外在胰腺*，食管*，卵巢*，肺*中也常常观察到***表达。，暴露的胞外结构允许抗体的结合，这些特点表明***性单克隆抗体开发的靶点。下文介绍Claudiximab（IMAB362）的一些临床数据。Claudiximab（IMAB362）Claudiximab是一个嵌合抗体，来源于小鼠，可变区与人的IgG1恒定区融合表达，其通过CHO表达体系生产，通过结合到肿瘤细胞表面引起ADCC和CDC作用，也可以诱导细胞凋亡和***细胞增殖。与化疗联用，可以增强T细胞浸润和诱导促炎因子，如图2所示。图（IMAB362）作用机制Claudiximab安全性在临床前动物模型中进行了***的评估，结果表明，Claudiximab通过CDC和ADCC作用***了**的生长及***了*细胞。在很多临床研究中，Claudiximab用于晚期胃食管*病人的***，临床数据如表1所示。表（IMAB362）临床数据在较早人体Ⅰ期单剂量递增研究中，入组的15例，分成从33-1000mg/m25个剂量组，每组3人，病人经过4周随访，如果疾病被控制。

    在临床I期试验中，**疫苗被证明有良好的耐受性，并且可以诱导出良好的抗体反应，现在，人们正在翘首以待它的有效性结果。，胃*、胰腺*、食道*以及转移和未转移卵巢*组织中可以大量表达此蛋白。该蛋白***个胞外区与其它Claudin家族成员相比特异性强，而其余部分的蛋白质结构差异并不***，所以，将***个胞外区蛋白作为革巴位来研制**疫苗具有很重要的现实意义。4、诱导自身抗体的理论研究**选择了靶分子构建一个自身蛋白的***性疫苗还需要诱导自身免疫系统产生针对自身蛋白的抗体。要产生足够高滴度的特异性抗体以***相关疾病，***性疫苗必须克服三个障碍T细胞耐受、B细胞耐受、在没有佐剂和抗原长效制剂的情况下诱导出抗体。众所周知，人体免疫系统主要是对外来入侵者发动攻击的，而对机体本身是不攻击的，这可能是由于机体具有能够识别"非我"与"自我"的能力。免疫系统的这种特性通常被称为耐受或无反应性。耐受发生在B细胞和T细胞水平。一般来说，T细胞耐受更严格一些。对许多抗原来说，在发生T细胞耐受的同时，正常的B细胞株却在体内存在。实际上，有三种机制导致了免疫耐受细胞株剔除，即特异性的淋巴细胞从淋巴细胞群中被彻底剔除；免疫无能。

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