定位准确、简便、快速、鲜明，在许多领域中仍占有不可取代的地位。如肾活检、皮肤活检中IgG、IgM、IgA、C3等检测，自身抗体的检测，传染病的快速诊断，单克隆抗体的筛选及鉴定等。随着科学技术地不断发展，免疫荧光组织化学技术已经广泛应用于生命科学的各个领域，放射出更加五彩缤纷的荧光。参考文献（1）AkivoshiKawamura,.（2）王伯沄.免疫荧光组织化学和荧光组织化学技术.第四军医大学科技资料增刊,1974;2:5-30.（3）.（4）WickG,TraillKN,.（5）.（6）蔡文琴,王伯沄主编.实用免疫细胞化学.成都：四川科技出版社1990，P968-977.（7）李成文.现代免疫化学技术.上海:上海科技出版社1992；P97-100.（8）Mahmudi-A3er-s,Lacy-P,Bablit2-B,(1-2):113-119.（9）Magro-C-M,(9):543-552.（10）(4):286-298.（11）GregoniWeber,(1):419-422.（12）SavigeJA,PaspaliansB,SilvestriniR,(ANCA)(18):568-571.（13）BallouB,FisherGW,DengJS,(3):251-257.（14）GruberHJ,HahnCD,KadaG,(5):696-704.（15）SouthweelBR,(5):1140-1151，江苏五色免疫组化.（16）ArsenievL,PickerdN,GoudevaL,(5):547-559，江苏五色免疫组化.（17）O'BrjenTE，江苏五色免疫组化,MetheneyCD,(TIGR)proteinintrabecularmeshworkandschlemm'(6):517.（18）HuangMC。

    因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。·乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。(3)其它固定剂·**：–对抗原性的保存好，但脱水性更强，较少用于组织标本，但细胞爬片常用**固定。3、抗原修复——原因·常规的石蜡切片标本均用甲醛固定，结果使得：–抗原性物质形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇；–蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。·要求：在染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。3、抗原修复——方法·化学方法·加热方法–水浴加热法–微波照射法–高压加热法–酸水解法(1)化学方法·主要是通过一些酶的作用，使抗原决定簇暴露。常用的酶有：胰蛋白酶、胃蛋白酶等。–胰蛋白酶：一般使用浓度为～，消化时间为37C，10～40**要用于细胞内抗原的显示；–胃蛋白酶：一般使用浓度为～，消化时间为37C、30～180**要用于细胞间质抗原的显示。·例如：Laminin、CollagenIV(2)水浴加热法·将玻片放入装有抗原修复液的容器中，加热至沸腾，持续10～15分钟。–优点：操作简单、经济，适用于所有的实验室。

    1)动物的选择选择什么动物来免疫取决于：·所需抗血清的量–小鼠只能提供～，而山羊能提供几升。·能供免疫用的抗原量–小鼠50μg足够，而山羊需要几毫克。(1)动物的选择(续)·动物的品系：免疫动物与提供抗原的动物之间的种系差异越大越好。–例如哺乳动物的抗原可选择非哺乳动物来制备抗体。–常用的动物有兔、羊、马、猪等，以兔(新西兰兔，年轻，健壮，体重在，雄性)为**常用。(2)佐剂(adjuvant)·一般可溶性抗原注射后，迅速从注射部位扩散、吸收代谢。佐剂可延长滞留时间，且延长免疫刺激作用。因此在制备抗体的过程中，常将抗原和佐剂一起注射。·**常用的佐剂是弗氏佐剂，又分为：–弗氏不完全佐剂(Freund'sincompleteadjuvant)–弗氏完全佐剂(Freund'scompleteadjuvant)弗氏不完全佐剂(Freund'sincompleteadjuvant,FIA)·是由油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂(羊毛脂或Tween80)混合而成，比例为1:1、2:1、3:1或5:1，可根据需要而定，通常2:1。·使用时与水溶性抗原按1:1比例充分混合，使抗原分散在佐剂中形成油包水乳剂。弗氏完全佐剂(Freund'scompleteadjuvant,FCA)·在弗氏不完全佐剂中加入活卡介苗或死的结核分枝杆菌(终浓度为2～20mg/ml)，即成为FCA。

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