⑹、滴加适量生物素标记二抗工作液，37℃孵育10-30分钟。⑺、PBS冲洗，5分钟x3次。⑻、滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液，37℃孵育10-30分钟。⑼、PBS冲洗，5分钟x3次。⑽、显色剂显色3-15分钟（DAB或NBT/BCIP）⑾、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，江苏四色免疫组化染色服务，封片。免疫组化化染色步骤冰冻切片4-8μm，室温放置30分钟后，入4℃**固定10分钟，PBS洗，5分钟x3，用过氧化氢孵育5-10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。免疫组化判定分析编辑免疫组化染色（IHC）从实验结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析，图片的确定与选取，相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容，只有严格的实验设计，江苏四色免疫组化染色服务，标准的实验操作，江苏四色免疫组化染色服务，专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求，这点对于形式为腹水，上清，培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确，一般而言，客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析，例如是简要还是详细的描述实验结果，需要实验数据否，图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与，则事先申明。免疫组化意义编辑近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现。

    是分泌性蛋白检测优先方法之一。下面介绍下免疫组化方法的具体实验流程步骤。实验流程简介一、SP三步法1）石蜡切片，常规脱蜡至水。2)（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（比较好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。8)PBS冲洗，3分钟×5次。9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。10)PBS冲洗，3分钟×5次。11）显色剂显色（DAB等）。12）自来水充分冲洗。13）可进行复染，脱水，透明。14）选择适当的封片剂封片。二、即用型二步法1）脱蜡、水化组织切片。2）根据所应用的一抗的特殊要求，对组织切片进行预处理。3)，以阻断内源性过氧化物酶，PBS或TBS冲洗。4）滴加一抗，室温或37℃孵育30~60分钟，或4℃过夜，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。5）滴加enhangcer增强剂，37℃30min，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。

    我身边有个研究生同学在我们实验室初次涉入免疫组化，听说步骤不难，跟我后面做了几次之后，就自己开始做了，连续做了三次，结果均是阴性染色。很扫兴，不知是什么原因导致的，后来我还是请教了上海舜田生物老师，她**提供给我我很大的帮助，解决问题的思路也逐步清晰。问题及其解答：免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液，怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果？另外，不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索比较好浓度。2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是比较好的时间和次数。若不行，还可高压修复。3、组织切片本身这种抗原含量低；4、血清封闭时间过长。5、DAB孵育时间过短。6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。7、开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。我的实际解决方案：1、首先，排除组织切片内的抗原有无丢失及其含量多少。免疫组化中两个**重要的因素是抗原和抗体。

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