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天津食品安全荧光定量PCR分析服务 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

信息介绍 / Information introduction

PCR检测方法在临床医学及实验室检验中**有价值的应用领域就是对***性疾病的诊断。理论上,只要样本有一个病原体存在,PCR方法就可以检测到。该方法对病原体的检测解决了免疫学检测的“窗口期”问题,天津食品安全荧光定量PCR分析服务,常用于疾病的早期诊断,可判断疾病是否处于隐性或亚临床状态。

大量的荧光定量PCR研究资料表明,天津食品安全荧光定量PCR分析服务,病原体数量与***性疾病病情的轻重程度、传染性及***效果均有相关性。因此,天津食品安全荧光定量PCR分析服务,通过荧光定量PCR方法得到的检测结果,一定程度上可以准确反映疾病***的情况。 天津食品安全荧光定量PCR分析服务

荧光定量PCR(Flurogenic Quantitative Polymerase ChainReaction,FQ-PCR;real-time quantitative PCR, RT-qPCR or qPCR), 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,标记**PCR产物进行实时监测反应,利用与之相适应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度 [1]  。

荧光域值(threshold)的设定:PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号标准偏差的10倍 上海转基因荧光定量PCR分析服务

荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程,然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中,对全程PCR扩增过程进行实时检测,根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线

Ct值:C**Cycle,t**threshold,Ct值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数

荧光背景信号阶段:在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号与背景无法区分,无法判断产物量的变化

自从1983年K. Mullis发明聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)以来,PCR技术很快成为科研、临床诊断的热点技术。

而实时荧光定量PCR技术,顾名思义,就是在PCR的基础上加入荧光基团,通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程,***通过对未知模板进行定量分析的方法。

目前,实时荧光定量 PCR 已成为不同样品间进行基因表达水平定量差异比较的**性方法。在过去十几年中,该方法迅速流行,涉及科学的多个领域,包括农业、环境、工业和医学研究。

实时荧光定量常用Taqman探针法和SYBR Green I法两类。

1.TaqMan探针法

TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量PCR技术。它的工作原理为有一对 PCR 引物和一条探针存在于PCR 反应体系中,有荧光淬灭基团存在于3′

端标记,有报告基团存在于探针的5′ 端标记,探针*和模板特异结合,两条引物之间是其结合点。因此信号仪器搜集不到,伴随反应的进展,探针在外切核酸酶的活性的作用下被切断,从而造成淬灭基团不能吸收基团的荧光能量,从而使荧光信号产生,所以模板 DNA 的拷贝数取决于信号的强度。

2.SYBR Green I法

SYBR Green I为一种具有绿色激发波长的染料,其发射波长比较大约为 520 nm,比较大吸收波长约为 497 nm,能够结合所有的双螺旋小沟区域。由于处于游离状态,SYBR Green I发出的荧光较弱,然而其结合双链 DNA之后,就会使得荧光**增强,荧光信号的增加完全同步PCR 产物的增加。 天津食品安全荧光定量PCR分析服务

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