是一种小分子维生素，分子量为244，是转氨甲酰基化过程中的辅酶。·抗生物素(avidin)，北京多标记免疫组化实验服务，又称卵白素或亲和素，是一种分子量为67000的碱性蛋白，对生物素具有很强的亲和力，比抗原抗体间的亲和力要高出100万倍。它由4个亚基组成，每个亚基都有生物素的结合位点。·两者均可与抗体等大分子生物活性物质相偶联，又可被酶类等多种示踪物所标记，形成生物素-抗生物素系统。–该系统一端偶联大分子生物反应体系，另一端连结标记物，后者加入酶的底物，产生颜色反应。(1)标记抗生物素—生物素法(labelledavidin-biotinmethod,LAB)：分为直接法和间接法。·直接法用生物素标记***抗体，与抗原结合；酶标记抗生物素，与生物素结合，然后进行酶呈色反应，北京多标记免疫组化实验服务。·间接法用生物素标记二抗，酶标记抗生物素，先用***抗体与组织抗原结合，再将第二抗体与***抗体相连结，北京多标记免疫组化实验服务，***进行呈色反应。(2)桥抗生物素一生物素法(bridgeavidin-biotinmethod，BRAB)–此法是用生物素分别标记抗体和酶，以抗生物素为桥，把二者连接起来，进行呈色反应。(3)抗生物素-生物素-过氧化物酶法(ABC法)·ABC法是在BRAB和LAB的基础上改良的方法。·ABC复合物是将过氧化物酶结合在生物素上。北京多标记免疫组化实验服务

    在放入氨水中返兰即可。13）封片为了长期保存，我们一般用中性树胶等封片，避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。2、免疫荧光方法中的重要环节1）冰冻切片制备建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2）组织切片固定切好片风干后立即用冰**等固定液进行固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3）血清封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。4）一抗孵育条件在免疫组化反应中**重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4℃、室温、37℃，其中4℃效果比较好；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37℃1-2h，而4℃过夜和从冰箱拿出后37℃复温45min。具体条件还要摸索。5）二抗孵育条件二抗一般室温或37℃30min-1h。北京六色免疫组化染色服务

多重荧光免疫组化染色技术

免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术，随着免疫zhiliao的崛起，越来越多**微环境种的标志物被发现与疾病zhiliao、进展密切相关，对这些标志物进行同时染色标记、并研究它们之间的共定位、表达量和距离关系成为肿瘤免疫研究的普遍需求。

酪氨信号放大技术原理

类似常规免疫组化的DAB显色法，TSA（Tyramide signal amplification）技术同样采用HRP标记的二抗，HRP催化加入体系的荧光素底物，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，使样品上稳定地共价结合荧光素。之后用热修复洗去非共价结合的抗体，再换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。

    在碱性条件下，易与蛋白质的赖氨酸-氨基反应而标记在蛋白分子上。(4)碘化丙啶(PI)·是常用的DNA荧光标记探针，可作为FITC的胞核对比染色。·PI可嵌入到双链DNA和RNA碱基对中并与之结合，但对碱基无特异性选择。·比较大吸收光谱是493nm，比较大发射光谱是630nm，呈红色荧光。2、荧光抗体的保存·一要防止抗体失活，二要保持荧光素不脱落和不受激发猝灭。–一般认为0～4C可保存1～2年，-20C可保存3～4年。–要小量分装，防止反复冻融。–保存前需加防腐剂(浓度为1:5000～10000的硫柳汞或1:1000～5000叠氮化钠)。3、免疫荧光的染色方法·免疫荧光染色法常用的有–直接法–间接法原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应(用来检测未知抗原)。直接免疫荧光法的操作步骤·标本的处理：–细胞涂片、细胞爬片浸入冷**或4%的多聚甲醛固定10min，然后用PBST(含pH)漂洗5min×3/次；–石蜡切片经脱蜡、梯度酒精脱水后，进行抗原修复，然后用PBST漂洗5min×3/次；·2%BSA或10%BSA37C湿盒内封闭30min·抗体染色：–在标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体(1:8或1:16稀释)，放在湿盒中，37C孵育30min；直接免疫荧光法的操作步骤(续)·PBS。

    我一般初次做一种新抗体，喜欢先用说明书建议的低浓度和高浓度做一次，然后决定是向高还是低方向摸索。一般先决定二抗的浓度（工作液就好办了，直接滴加），重点摸索一抗的**适浓度。注意：免疫反应中存在前带和后带效应，这提示不是浓度越高，阳性率就越高，反之亦然。⑷重要原因排除之后，也不要忽视抗体的质量：原装抗体一般比较稳定，效果较好；而进口分装次之；工作液可能要注意质量问题。3、同时，DAB的孵育时间可能要适当延长，在镜下观察，有时可延长至30min。但一般3-10min比较好，此时背景也较浅。否则，说明抗体浓度不合适。4、***，血清封闭时间也可相应缩短。一般10-30min，但这个时间可以调整，封闭主要是降低切片的总体背景着色。5、此外，细胞通透也不可忽视。许多战友认为石蜡切片一般不需细胞通透，因为切片时可能已经把细胞切开了，但对于胞**白，建议还是通透一下，促进抗体等试剂充分进入参与反应。6、以上原因，都是针对实际中常见原因来进行分析的，前提是排除操作者的操作错误而引起阴性结果，这就需要新手还是要设置阳性对照以排除方法的问题。还有抗体稀释液的pH值过低等其它原因的干扰。总之，要想把免疫组化做好，可能每一个环节都很重要。江苏多标记免疫组化技术服务

北京多标记免疫组化实验服务

2. 免疫酶细胞化学技术是目前免疫组织化学研究中**常用的技术．基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究．3. 免疫胶体金技术就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性，定位或定量研究．由于胶体金的电子密度高，多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究．北京多标记免疫组化实验服务

上海朝瑞生物科技有限公司创立于2003-01-22，总部位于上海市，是一家1.发布科研技术 2.发布应用技术 3.发布专业专长 4.发布科研成果 5.发布我的需求 6.发布筛选检验检测服务 7.发布协同代研发服务 8.发布升级改造产品服务 9.发布实验室及仪器设备共享 10.发布培训基地共享 11.发布工厂代加工及共享车间 12.发布科研/项目团队招聘13.发布研究生婚恋 14.发布项目整包服务 15.发布资源交换业务的公司。上海朝瑞科技深耕行业多年，始终以客户的需求为向导，为客户提供***的[ "科研技术服务", "应用技术服务", "科研成果转化", "科学产品销售" ]。公司终坚持自主研发创新发展理念，不断优化的技术、产品为客户带来效益，目前年营业额达到2000-3000万元。上海朝瑞科技创始人仲绪军，始终关注客户，以优化创新的科技，竭诚为客户提供比较好的服务。

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