定位准确、简便、快速、鲜明，在许多领域中仍占有不可取代的地位。如肾活检，天津五色免疫组化检测服务、皮肤活检中IgG、IgM、IgA、C3等检测，自身抗体的检测，传染病的快速诊断，单克隆抗体的筛选及鉴定等。随着科学技术地不断发展，免疫荧光组织化学技术已经广泛应用于生命科学的各个领域，放射出更加五彩缤纷的荧光。参考文献（1）AkivoshiKawamura,.（2）王伯沄.免疫荧光组织化学和荧光组织化学技术.第四军医大学科技资料增刊,1974;2:5-30.（3）.（4）WickG,TraillKN,.（5）.（6）蔡文琴,王伯沄主编.实用免疫细胞化学.成都：四川科技出版社1990，P968-977.（7）李成文.现代免疫化学技术.上海:上海科技出版社1992；P97-100.（8）Mahmudi-A3er-s,Lacy-P,Bablit2-B,(1-2):113-119，天津五色免疫组化检测服务.（9）Magro-C-M,(9):543-552.（10）(4):286-298.（11）GregoniWeber,(1):419-422.（12）SavigeJA,PaspaliansB,SilvestriniR,(ANCA)(18):568-571.（13）BallouB,FisherGW，天津五色免疫组化检测服务,DengJS,(3):251-257.（14）GruberHJ,HahnCD,KadaG,(5):696-704.（15）SouthweelBR,(5):1140-1151.（16）ArsenievL,PickerdN,GoudevaL,(5):547-559.（17）O'BrjenTE,MetheneyCD,(TIGR)proteinintrabecularmeshworkandschlemm'(6):517.（18）HuangMC。天津五色免疫组化检测服务

    [1]免疫组化分类编辑免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。这些常用免疫组织化学方法的原理如下：1.免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.2.免疫酶细胞化学技术是免疫组织化学研究中**常用的技术．基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究．3.免疫胶体金技术就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性，定位或定量研究．由于胶体金的电子密度高，多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究．[1]免疫组化作用编辑免疫组化标本实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。北京七色免疫组化分析服务

    这样你才能大胆地去**和纠正一些错误的步骤，如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是**重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。比如温度有4℃、室温、37℃。我推荐4℃比较好，反应**温和，背景较浅；而37℃反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。2、定位和定性是免疫组化比较大的优势。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析优先方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析**为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。4、免疫组化实验一定要设置阳性和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。

    因而它是大多数免疫组化中优先的组织标本制作方法。1、取材的特殊要求及注意事项·标本新鲜：一般在2h以内进行，超过2h，组织将有不同程度的自溶，其抗原或变性消失，或严重弥散。·取材部位：除取病灶或含待检抗原部位外，还应取病灶与正常交界处，即所取组织切片中同时应有抗原阳性和阴性区，以形成自身对照。–细胞坏死后，不仅抗原弥散或消失，而且常引起非特异着色，干扰观察，因此取材时应尽可能避开坏死区。1、取材的特殊要求及注意事项(续)·避免挤压：取材时组织受挤压可使边缘部细胞形态改变并加深非特异着色，因而取材时应使用锋利的刀刃；–镊取组织动作要轻；–经窥镜直接钳取的组织往往有过度挤压，观察结果时应有所考虑。2、固定及常用的固定液·取材后的组织需立刻投于固定剂中–固定使组织和细胞的蛋白质凝固，终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持原有结构和形态；–对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或弥散。·常用固定液：固定剂品种很多，但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同，各有优缺点。–醛类（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）–醇类（常用乙醇）–其它（**）(1)醛类·甲醛。

    pH)漂洗5min×3/次，不时震荡(洗去多余游离的荧光素标记的抗体)。·缓冲甘油封片–分析纯无荧光的甘油9份+pH，。·镜检：在荧光显微镜下观察。·优点：方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。·缺点：敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。若检测多种抗原需制备多种相应的荧光标记抗体。直接免疫荧光法的注意事项·对荧光标记的抗体的稀释：要保证抗体的蛋白有一定的浓度；·一般稀释度不应超过1:20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。直接免疫荧光法的注意事项(续)·染色温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化；–染色时间：从10min到数小时，一般30min；–染色温度：多采用室温(25C)，高于37C可加强染色效果，但对不耐热的抗原(如流行性乙型脑炎***)可采用0-2C的低温，延长染色时间。–低温染色过夜较37C30min效果好的多。直接免疫荧光法的注意事项(续)·试验时需设置下列对照：–自发荧光对照(空白对照)：标本加，。–阳性对照：用已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。–特异性对照(***试验)：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。天津五色免疫组化检测服务

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    1)动物的选择选择什么动物来免疫取决于：·所需抗血清的量–小鼠只能提供～，而山羊能提供几升。·能供免疫用的抗原量–小鼠50μg足够，而山羊需要几毫克。(1)动物的选择(续)·动物的品系：免疫动物与提供抗原的动物之间的种系差异越大越好。–例如哺乳动物的抗原可选择非哺乳动物来制备抗体。–常用的动物有兔、羊、马、猪等，以兔(新西兰兔，年轻，健壮，体重在，雄性)为**常用。(2)佐剂(adjuvant)·一般可溶性抗原注射后，迅速从注射部位扩散、吸收代谢。佐剂可延长滞留时间，且延长免疫刺激作用。因此在制备抗体的过程中，常将抗原和佐剂一起注射。·**常用的佐剂是弗氏佐剂，又分为：–弗氏不完全佐剂(Freund'sincompleteadjuvant)–弗氏完全佐剂(Freund'scompleteadjuvant)弗氏不完全佐剂(Freund'sincompleteadjuvant,FIA)·是由油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂(羊毛脂或Tween80)混合而成，比例为1:1、2:1、3:1或5:1，可根据需要而定，通常2:1。·使用时与水溶性抗原按1:1比例充分混合，使抗原分散在佐剂中形成油包水乳剂。弗氏完全佐剂(Freund'scompleteadjuvant,FCA)·在弗氏不完全佐剂中加入活卡介苗或死的结核分枝杆菌(终浓度为2～20mg/ml)，即成为FCA。天津五色免疫组化检测服务

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