如果细胞未能增加端粒酶表达，那么它们也不能永生化，并且**终因端粒变短而死亡，这是因为染色体连接在一起，在细胞分裂时会破碎，江苏动物细胞永生化。具有这种TERT启动子突变的细胞更可能上调端粒酶，这就使得它们尽管具有非常短的端粒，但仍能继续生长。不过，Hockemeyer说，端粒酶水平是较低的，结果就是一些未受保护的染色体末端在存活的突变细胞中出现，江苏动物细胞永生化，这可能导致突变和进一步促进**形成。Hockemeyer说，江苏动物细胞永生化，“在我们的论文发表之前，人们可能认为在TERT启动子中*获得这一个突变就足以使细胞永生化，以及当这种情形在任何时候发生时，端粒缩短就被消除。我们证实这种TERT启动子突变不能立即足以阻止端粒缩短。”然而，仍然不清楚**终是什么导致端粒酶上调表达，从而使得细胞发生永生化。Hockemeyer说，它不可能是另一个突变，而是影响端粒酶基因表达的表观遗传变化，或转录因子或其他的结合到端粒酶基因上游启动子上的调节蛋白表达的变化。“然而，我们有证据证实，第二步必须发生，而且是在端粒的长度缩短至一个临界值时发生的，在这时，端粒是功能故障的，并且导致基因组不稳定。”回想起来，这并不令人吃惊虽然大多数**似乎需要端粒酶变得永生化。江苏动物细胞永生化

    例如EB***(epstein-barrvirus,EBV)、猿猴***40(simianvirus40,SV40)和人**瘤***(humanpapillomavirus,HPV)。这些******其天然宿主细胞，能诱导细胞永生化。EBV能使B淋巴母细胞永生化形成淋巴母细胞样细胞系，它是通过潜伏蛋白***细胞因子与其受体相互作用的途径使细胞永生的。EBV永生化B细胞的一个*****的特点是端粒酶活性的提高，这可能是导致B细胞永生的主要原因。目前，EB***介导的细胞永生化应用**多的是B淋巴细胞，其他细胞中的应用很少。SV40是简单的真核细胞***，SV40的T抗原片段是**常用的目的片段，将其整合入靶细胞核内并表达，可导致细胞增殖活力的改变并表现出多种与**相关的转化显型。应用的方法包括：野生型SV40***共培养***靶细胞、磷酸钙法、电穿孔以及逆转录***载体法等。HPV已成功将人的包皮细胞、角化上皮以及乳腺、胰导管和口腔等的上皮细胞永生化。HPV***的早期表达蛋白E6和E7在细胞永生化中起决定性作用。E6和E7蛋白能够改变细胞的终末分化，诱导细胞进入S期，使细胞绕过正常细胞的周期检查点。***法获得的永生化细胞往往发生细胞表型改变，而且一般只应用于***的特定宿主细胞。由于该法将整个***基因组导入了细胞，因此。上海EBV法细胞永生化

virus基因转染法

很多virus转染能够诱导细胞永生化，例如EBvirus(epstein-barr virus, EBV)、猿猴virus40 (simian virus40, SV40)和人**瘤virus(human papillomavirus, HPV)。这些virus转染其天然宿主细胞，能诱导细胞永生化。

EBV能使B淋巴母细胞永生化形成淋巴母细胞样细胞系，它是通过潜伏蛋白activate细胞因子与其受体相互作用的途径使细胞永生的。EBV永生化B细胞的一个**明显的特点是端粒酶活性的提高，这可能是导致B细胞永生的主要原因。目前，EBvirus介导的细胞永生化应用**多的是B淋巴细胞，其他细胞中的应用很少。

SV40是简单的真核细胞virus，SV40的T抗原片段是**常用的目的片段，将其整合入靶细胞核内并表达，可导致细胞增殖活力的改变并表现出多种与**相关的转化显型。应用的方法包括：野生型SV40virus共培养转染靶细胞、磷酸钙法、电穿孔以及逆转录virus载体法等。

    建立人卵巢*永生化细胞系,为卵巢*体外研究提供实验模型。方法利用基因重组技术构建猴肾virus40(SV40)T抗原基因的gaoxiao真核表达载体pcD2SV40。将其转染10例原代培养的早期传代细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系。免疫组化检测细胞的上皮起源,用PCR、RTPCR和SouthernBlot方法鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达。观察所建立的永生化细胞系的染色体核型。结果10例转染细胞中,6例筛选出抗性克隆。角蛋白免疫组化证实3例为上皮起源。其中2例上皮起源细胞得以扩大培养成系,长期稳定传代,分别命名为BUPH:OVSC2和BUPH:OVCA3。经鉴定两种细胞系中存在SV40T在基因水平及转录水平的表达。其染色体核型均符合人体恶性细胞特征。结论利用SV40T抗原基因进行人卵巢*原代细胞的永生化是一种可行的、可重复的建系方法,可提高卵巢*细胞成系机率。

    已传25代,传代时间为5-6天,传代比为1:2-3。USEC-1细胞在无血清培养基中能正常生长。软琼脂糖培养、裸鼠致瘤试验阴性。结论本实验成功建立了大鼠椭圆囊上皮细胞永生化细胞系USEC-1,并进行了初步的鉴定。本细胞系基本上保留了原代USEC细胞的表形特征,又不具有瘤细胞特征,可用于毛细胞分裂、分化、再生及内耳分子遗传机制研究。【作者单位】：浙江省中医院【分类号】：R764下载全文更多同类文献PDF全文下载CAJ全文下载(如何获取全文？欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式，AdobeReader*支持PDF格式【相似文献】中国期刊全文数据库**条1郑贵亮;郭维;翟所强;;脂质体转染前庭椭圆囊上皮细胞的影响因素[J];山东医药;2007年33期2杨仲昆;;人内耳椭圆囊内淋巴管瓣膜及其与椭圆囊管的关系[J];解剖学通报;1965年03期3杨占泉;;美尼尔氏病椭圆囊和内淋巴管的基底膜病理[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;1986年04期4;成纤维细胞生长因子受体在***链霉素损伤的成年鼠椭圆囊中的表达[J];国外医学(耳鼻咽喉科学分册);1999年06期5贾宏博,于立身,王奎年,戴建国,毕红哲;椭圆囊和球囊在线加速度前庭知觉中的相互作用[J];中华航空医学杂志;1996年04期6。江苏动物细胞永生化

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正常组织来源的细胞在体外培养条件下可分裂生长，但经过有限次数的传代后，就会停止增殖，发生衰老和死亡，这种现象称之为海弗利克极限。有的细胞自发或受外界因素的影响，可以从增殖衰老危机中逃离，从而拥有无限增殖的能力，该过程称之为细胞永生化。然而自发永生化的几率非常小，啮齿类动物为10-5-10-6， 而人类细胞则更为罕见， 小于10-12。通过转染技术将外源性永生化基因导入目的细胞或诱导衰老相关基因突变，可以增加永生化的发生率，从而建立稳定的永生化细胞株。

永生化细胞能够提供稳定均一、性状一致的细胞来源，并且可以降低材料成本，因此，它是体外研究细胞增殖、分化、凋亡、衰老等的理想模型，加之，永生化细胞和肿瘤细胞关系密切，所以永生化细胞也是研究**发生机制的重要模型。另外，由于永生化细胞具有可以多次传代的特性，可以利用各种细胞永生化的方法使那些传代困难、增殖缓慢、容易衰老的细胞获得永生，从而为研究人员提供更多的细胞资源。 江苏动物细胞永生化

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