一代PCR采用电泳的方式对PCR产物进行分析，主要的分析内容有：条带大小、条带数量、条带浓度等。根据电泳条带的这些信息能够实现研究者的某些实验目的，比如制备DNA片段、检测目的序列、对目的基因表达进行定性分析等。一代PCR的比较大缺点在于无法实现精确定量。概括一代PCR：看PCR产物的电泳条带。二代PCR即荧光定量PCR，它通过在反应体系中加入能指示反应进程的荧光试剂来实时监测荧光的积累，借助荧光曲线的Cq值来定量起始靶基因的浓度。但依赖于Cq值仍然是目前定量PCR比较大的技术瓶颈，只有在规范的实验流程、统一的设计思路下，得到的结果才具有可重复性和可比性。而且在低拷贝靶分子、模板浓度差异细微的条件下，其检测的灵敏度、精确度都受到了限制。概括第二代PCR：检测反应体系中荧光的实时变化。三代PCR即数字PCR应运而生，北京无创产前判断数字PCR，北京无创产前判断数字PCR，北京无创产前判断数字PCR，它采用直接计数目标分子而不再依赖任何校准物或外标，即可确定低至单拷贝的待检靶分子的精确数目。实现这一过程的关键在于采用某种分散手段，使一个完整的PCR体系分散成为成千上万个**的PCR体系，每个PCR体系中只包含一个或零个模板（实际每个微体系中的模板数符合泊松分布）。这样分别检测这些体系是否发生了PCR反应并且进行计数。 生物技术和生物工程没有实质性的差别，都是属于应用科学。北京无创产前判断数字PCR

1999年霍普金斯大学的Vogelstein教授首先提出了第三代的Digital PCR（数字PCR）的概念。此后数字PCR技术得到迅速的发展。数字PCR是一种核酸检测和***定量的新方法。同传统PCR相比，数字PCR增加了一步分隔(partitioning)的操作，将几十微升的反应体系分隔成了众多微小**反应体系。核酸模板在这种分割过程中被充分稀释，理想状态下每个微反应体系中至多含有1个分子的核酸模板。和qPCR不同，数字PCR不对扩增过程进行实时监测，而是检测end-point的荧光信号。扩增完成后所有液滴的荧光将逐个被识别并进行计数，不需要构建标准曲线，就可以得到***定量的结果。北京无创产前判断数字PCRCt值就是指可以检测到荧光值对应的循环数；数字PCR是***的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸。

**学研究是数字PCR的重要应用领域，该技术作为极为重要的工具，能够识别DNA突变（例如EGFR）、**患者用药监控、基因扩增检测、循环肿瘤细胞（CTC）特性研究、长链非编码RNA检测、液体活检中循环的核酸（cfDNA）和肿瘤细胞（CTC）的定量等研究中。 **标志物稀有突变检测在相比于野生型DNA，**相关的突变序列比例较低，经常无法检测。而凭借其超高灵敏度，dPCR系统可以很容易地定量分析低至0.001%-0.0001%的突变频率。之前用任何方法都无法实现准确稳定检测的样本，现在可以使用dPCR轻松进行定量分析。例如，已实现肺*相关的表皮生长因子受体（EGFR）中T790M突变的检测，可以更好地评估抗酪氨酸激酶抑剂的疗效。

数字PCR是新型起来的一种核酸分子***定量技术。该技术可直接获得DNA分子的拷贝数，实现其实样品中核酸分子的***定量，且无需标准品或内标。数字PCR已经被广泛应用到医学、生物学等各个领域，如拷贝数变异、突变检测、复杂来源样品中低丰度核酸分子的检测、NGS数据验证、miRNA等微小差异表达研究、单细胞基因表达分析等方面，在已知突变的**分子标志物检测、传染病病原体检测、基因组三倍体分析和基因表达分析等领域展现了强大的优势。一般大学都设在生命科学院内，与生物技术，生物工程是兄弟专业。

纳流芯片的使用提供了便捷和直观的机制来同时平行运行上千个PCR反应。每个孔都加入了样品、扩增混合物和 TaqMan测定试剂的混合物，然后进行单独分析以检测存在（阳性）或不存在（阴性）终点信号。考虑到孔可能接收到多个靶标序列分子，使用泊松模型应用了一个校正因子。

数字PCR的优点无需依赖参考物或标准品通过使用更多PCR复制物能够提高精确度对***剂具有较高耐受性能够分析复杂混合物对较小倍数改变的线性检测  

数字PCR仪器和试剂能够提高现有TaqMan测定的性能，从而实现更高的灵敏度、精度和***定量，使应用从中获益。 数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子***定量技术。江苏专业数字PCR检测服务

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数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子***定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的***定量。

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