数字PCR(d PCR)是近年来引起重视并迅速发展起来的一种突破性的核酸定量分析技术。该技术先将核酸模板进行稀释,分配到大量**的反应单元中,使每个反应单元中只有单个模板分子,然后进行PCR扩增反应,扩增结束后对每个反应室的荧光信号进行统计学分析,来定量DNA拷贝数。数字PCR采用先扩增后定量，温州高灵敏数字PCR定量检测服务,因此不依赖扩增曲线的循环阈值(Ct),也无需采用内参基因和标准曲线,准确度高、重现性好,可以实现***定量分析。由于其独特的技术优势,已经在临床诊断、转基因成分定量、单细胞基因表达分析，温州高灵敏数字PCR定量检测服务，温州高灵敏数字PCR定量检测服务、环境微生物检测和下一代测序等研究领域显示出巨大的优势和应用前景。本文对数字PCR技术原理、定量分析方法、系统分类和应用等进行概述。DNA聚合酶依赖的酶促合成反应，扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。温州高灵敏数字PCR定量检测服务

applied biosystems于2013年也推出了产品，Quant Studio 3D数字PCR系统，这也是目前数字PCR市场上***型号的产品。采用高密度的纳升流控芯片技术，样本均匀分配至20,000个单独的反应孔中。在整个工作流程中，样本之间保持完全隔离，可以有效地防止样品交叉污染，减少移液过程，简化操作步骤。同时芯片式设计避免了微滴式系统可能面临的管路堵塞问题。作为applied biosystems在OpenArray芯片平台之外推出的全新的芯片式数字PCR系统，值得一提的是，这个全新的系统在设计理念上综合考虑了系统稳定性与运行成本因素，直接反映了该系统“适合所有分子生物学实验室使用的数字PCR系统”的市场定位。2013年，Thermo Fisher收购applied biosystems。上海单细胞基因表达数字PCR其分支有生物分类学、生理学、动物学、植物学、微生物学、生物化学、遗传学、分子生物学等。

疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室可以将基于TaqMan探针法的定量PCR体系无缝地转移到数字PCR上，从而满足该类实验室对于检测结果的要求：灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的精确定量结果，同时操作简便， 数字PCR技术因起高精密度、耐受能力强、高灵敏度等优点，逐渐被用于病原微生物载量分析的相关研究。如HIV抗逆转录病原微生物医疗过程中病原微生物残留量的监控；HBV耐药突变的检测；HCV的分子分型；抗甲氧西林金黄色葡萄球菌的院内监控；环境微生物不同功能基因之间的连锁分析等等。

数字PCR系统可以开展多项应用研究，包括肺*液体活检、无创产前检测、药化性耳聋检测、HBV DNA的超高灵敏度检测和侵袭性真核菌病检测。数字PCR是未来十年临床分子诊断的基本平台，会在临床诊断中广泛应用。 数字PCR技术应用于遗传病的优势，其中包括染色体非整倍体综合征、单基因遗传病、微缺失微重复综合征等遗传病。此外，数字PCR应用于液体活检、转基因产品成分检测和NGS文库质控。数字PCR技术的未来发展方向——多重靶标检测，还可开展多重数字PCR方面的重要研究。 根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。

DNase I footprinting是一种精确测定DNA结合蛋白在DNA分子上的结合位点的方法。凝胶阻滞实验（EMSA）和DNase I足迹分析实验是目前两种常用体外研究核酸与蛋白相互作用的方法，凝胶阻滞实验可以确定转录因子是否与DNA直接结合，而DNase I足迹分析实验则可以精确鉴定其结合的DNA序列，从而帮助我们研究基因转录调控的机制。本技术服务利用荧光标记法结合测序的方法来进行DNase I足迹分析实验。检测灵敏高，获得的保护区域清晰，图片的质量好。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域：拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究。上海单细胞基因表达数字PCR

由于生物技术将会为解决人类面临的重大问题如粮食、健康、环境、能源等开辟广阔的前景。温州高灵敏数字PCR定量检测服务

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