RNA 完整性检测

       取 1 µl RNA 加入适当 RNA loading buffer，混匀，江苏四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元，进行电泳检测。若出现清晰的三条带，分别为 28S、18S 和 5S，且条带之间界限清晰，就证明 RNA 样品的完整性非常好。可参考以下图示：

RNA 纯度检测

    利用分光光度计或者NanoDrop 仪检测RNA 样品在260nm、280nm 处的OD 值， 并计算 A260/A280 的比值，江苏四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元。纯的 RNA 的比值应在 2.0 左右。

提取到的 RNA 得率很低。可能的原因如下：

样品裂解或匀浆处理不彻底。

RNA 沉淀条件和时间太短，没有充分沉淀 RNA 造成 RNA 损失。

***得到的 RNA 沉淀未完全溶解。

取0，江苏四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟。江苏四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元

向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。

2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。

吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。

第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。

向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。

向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。 天津新手RNA提取试剂盒信赖推荐室温放置5min，12000rpm室温离心2min 即得到RNA。

产品特点：

■ 从微量的样本中纯化得到的高质量的RNA，如显微切割得到的组织， 纤维组织和细胞 。

■ 配有***的DNase Ⅰ，可有效去除DNA 污染。

■ RNA纯度更高，无杂质残留，特别适合于对纯度要求很高的下游实验。

■ 操作安全可靠，无需酚/ 氯仿抽提，无需氯化铯梯度离心，无需氯化锂或乙醇沉淀。

保存条件：

室温（15-25℃）保存

DNase Ⅰ，缓冲液RDD，RNase-Free ddH2O

（管装）：2-8℃保存

自备试剂

β- 巯基乙醇、无水乙醇

下游应用：

■ RT-PCR。

■ Northern Blot、Dot Blot。

■ Real-Time PCR。

■ 芯片分析。

■ polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

按照每毫升**初的 Trizol 加入 1 ml 75%乙醇（DEPC 水配制）的比例，Vortex混匀或颠倒混匀，让沉淀悬浮起来以充分洗涤沉淀中的盐分。

9、4°C，12000rpm 离心 5 分钟，弃上清。剩余的少量液体再用离心机瞬甩一下， 彻底去掉上清液。注意不要吸到沉淀，否则会造成 RNA 损失。

10、室温放置空气干燥 5-10 分钟，待 RNA 沉淀略干后，加入适量（约 20-100µl）的 RNase-free 水溶解 RNA 沉淀，-80°C 冻存。【注】切勿让 RNA 彻底干燥，否则将导致 RNA 溶解度降低。

医生或实验室人员收到样本后，对样本进行去除杂质、破碎、建库等一系列操作），再进行上机测序。

操作快速：**快10分钟即可获得高质量的总RNA提取纯度高：不含基因组DNA污染，不需DnaseI酶处理产量高：很大程度地获得样品中的RNA室温条件下完成总RNA提取

RNAExpress Lysis Buffer于4 ℃避光保存，其他溶剂及吸附柱室温保存。

在漂洗液RWB中加入指定量的无水乙醇（分析纯），在试剂瓶上标注出，使用完毕后要拧紧试剂瓶，防止乙醇挥发。

洗脱缓冲液REB中不含有EDTA，一般情况不影响下游实验。

高度依赖进口，成本居高不下，这也导致我国大量基因检测企业技术门槛低、盈利困难。上海快速RNA提取试剂盒信赖推荐

将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。江苏四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元

向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。

向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。

12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。

将吸附柱放入新管中，向膜**滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA

所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

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