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    其中claudin-4、claudin-7和ctaudin-18研究较多。Claudin-4定位在人类染色体7ql1。Lee等用免疫组化法研究发现E-cadherin和claudin-4在69n/。的胃*中均表达减少，且更常见于弥散型胃*和分化低的胃*，认为两种蛋白作用类似，可能与胃腺体结构的破坏和腺体细胞的分化丧失有关。Resnick等研究远端胃*患者通过COX多变量分析，发现**度claudin-4的表达与胃*患者生存期***下降有关。此外，Cunningham等。通过免疫组化方法发现claudin-4在36例肠化和14例不典型增生患者中均完全有表达，在98%胃*原位组织和**的转移*组织中也有表达，而*有15%的正常胃黏膜组织表达claudin-4，说明claudin-4在胃*早期的致*过程中也起了重要作用。Johnson等，在Trefoilfactor-l基因敲除的小鼠模型中通过基因序列分析发现，daudin-7基因是胃*中经常表达上调的基因，使用免疫组化方法发现，小鼠和人类胃黏膜腺体不典型增生时，常过度表达clandin-7，而其周围正常胃黏膜组织却不表达。其在肠化、不典型增生和胃*中表达阳性率分别为30%、80%和70%，并且多在肠型胃*中表达。Park等通过免疫组化和Westemblot方法发现，claudin-7更常表达于肠化、腺瘤和胃*中，而在47%的正常胃黏膜中不表达。天津重组人源Claudin18.2蛋白

    MNaH2P04，MTris()充分平衡Ni柱，先用含10mmo1咪唑的6M尿素，，()洗脱杂蛋白，再用含250mmo1咪唑的6M尿素，，(pH8,0)洗脱目的蛋白。收集洗脱峰，纯化产物透析至2M尿素，，Tris(pH)复性，终浓度lmg/ml。***透析入Tris(pH)中，PEG8000浓縮后，用Bradford法测定蛋白浓度。动物模型实验小鼠分组与免疫方案分组将24只BALB/c小鼠分成4组，于小鼠背部皮下按照lx^个/只，每组6只分别接种胃*MFC和胰腺*MPC-83细胞各2组。每个肿瘤细胞接种2组荷瘤小鼠，待成瘤后，按照常规免疫方法分别注射盐水。在第4次免疫后10天摘眼球**，测定血清中抗。免疫方案背部皮下多点注射；rhClaudinl8,2:40ug/只+生理盐水总体积为200^L/只，分别隔周注射；第4次，使用:40Hg/只+生理盐水200liL/只，腹腔注射。ELISA法测定血清抗，收集抗血清，通过间接ELISA测定血清抗(:1311出。每个样品均设6个孔。ELISA实验方法如下所需溶液的配制a.包被缓冲液碳酸盐缓冲液取Na2C03:g(终浓度mol/L)，NaHC03:(终浓度mol/L)，纯水定容至200mL(),有效期两周。b.洗涤液含Tween-20的PBS()。c.封闭液含1%BSA的洗涤液。d.稀释液含BSA的洗涤液。e.底物缓冲液Na2HP04*12H20:g，柠檬酸mL(pH)。f.底物显色液OPD:8mg。

    依次包括下述步骤(1)按照GeneBank中人***个胞外区基因序列，采用RT-PCR常规方法，上游引入五②RI酶切位点，下游引入S"/1酶切位点获得***表位(即^83。.843表位氨基酸序列为QYIKANSKFIGITE，以引发体内较强的细胞免疫反应，从而促进**疫苗更好发挥作用)基因连接(TT83,3基因片段的5'末端为5fl附ffl，3'末端为五②RI)，插入pQE-30载体。连接产物转化感受态细胞DH5a，挑取单克隆培养过夜，提取质粒，经酶切鉴定获得预期大小的插入片段，进行测序；测序正确的质粒命名为，工程菌命名为pQE-30-rhHis-(2)重组蛋白表达挑取工程菌单菌落接种于5mLLB培养液(含Ampl00mg/L)中，37t摇床培养过夜，次日以l:100的比例转接到含Amp的LB培养液中，在37'C摇床培养3h至对数生长中期(OD6。。为)，加入终浓度为lmmol/L的IPTG，继续培养4h，离心收集菌体；表达产物的鉴定SDS-PAGE取30uL裂菌上清，加入30HL2X载样缓冲液，混匀。另取其他样品加入30"L水，混悬后再加入30uL2X载样缓冲液混匀。沸水中煮5min，12000rpm离心5min,取10uL上清加样于18%分离胶6%浓縮胶，上样后电压为60V约20min，样品进入分离胶后电压升至100V约4-5h，用R-250振荡染色2-3h，脱色直至背景清晰后制备干胶保存。

    Claudin***靶点简介胃*是一种在世界范围内常见的**之一，在发达国家**相关的死亡因素中胃*占第四（男性）和第五（女性）。大多数的的胃*患者在确诊后已经处于晚期阶段。早期胃*通过胃部切除手术可能被***，复发率仍然达到50%。目前为止，晚期胃*是不可***的，经过化疗中位生存期为8-10个月。研究多重化疗方案用于提高响应率和耐受性，然而5年生存率仍然是渺茫的。免疫疗法和靶向***，例如曲妥珠单抗（trastuzumab）、雷莫芦单抗（Ramucirumab）和激酶***剂，已经用于各种**的***包括胃*。随着靶向疗法的出现，靶向不同路径的各种分子用于胃****上，，在正常的组织中*表达在分化的胃粘膜上皮细胞上，使得开发针对***性抗体具有更大的***潜力、更低的毒性，有更大的比较好用药剂量空间。Claudin蛋白Claudin蛋白由ShoichiroTsukita及其同事在1998年发现，是细胞紧密连接的重要分子。其构成了细胞旁屏障，控制细胞间分子的流动。其结构如图1所示，该分子具有四个跨膜结构域，NH2端和COOH端位于胞内。不同的Claudin蛋白表达在不同的组织，与各自组织**发生具有相关性，Claudin-1在结肠*上，Claudin-10在肝细胞*上，Claudin-18在胃*上具有相应的临床价值。上海重组人源Claudin18.2蛋白全国发货

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    5-trinitro-1,3,5-triazine)[J].CurrentMicrobiology,2017,74(2)::[56]JinQC,JinZH,ZhangLJ,[J].CurrentMicrobiology,2012,65(6)::[57]HuangJ,WuRZ,ChenD,[J].JournalofMicrobiologyandBiotechnology,2016,26(7)::[58]ZhengDQ,ChenJ,ZhangK,[J].AppliedMicrobiologyandBiotechnology,2014,98(7)::[59]GuanNZ,inHD,ChenRR,[J].ScientificReports,2014,4:6951.[60]ZhaoJF,CaoL,ZhangC,[J].ernationalJournalofMolecularSciences,2014,15(11)::[61]PinelD,ColatrianoD,JiangH,[J].BiotechnologyforBiofuels,2015,8::[62]ChenXY,WeiPL,FanLM,[J].AppliedMicrobiologyandBiotechnology,2009,83(3)::[63]WatrousJ,RoachP,AlexandrovT,[J].ceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,2012,109。天津高纯度人源Claudin18.2蛋白

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